发明名称 |
以CA19-9 cDNA片段为模板制备RNA探针的方法 |
摘要 |
本发明提供了一种以CA19-9 cDNA为模板制备RNA探针的方法。该方法包括以下步骤:针对CA19-9 mRNA序列筛选多个靶序列,对于每个靶序列设计至少一对引物,所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段,所述多重DNA片段能包括所有靶序列;从CA19-9 cDNA质粒中,采用上述引物,通过PCR扩增得到所述多重DNA片段,纯化后混合,作为模板;加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应,将UTP掺入产物,纯化后得到RNA探针。本发明得到的cRNA探针能够全部覆盖所有靶序列,简化了探针制备步骤,大幅度缩短整个实验时间,探针特异性更高,稳定性更强,背景信号更低且灵敏度更高。在此基础上,本发明提供了一种快速检测胰腺癌相关的CA19-9表达的试剂盒。 |
申请公布号 |
CN105567845A |
申请公布日期 |
2016.05.11 |
申请号 |
CN201610083165.9 |
申请日期 |
2016.02.05 |
申请人 |
广州复能基因有限公司 |
发明人 |
徐学明;鲁隼;冯俊清 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
广州三环专利代理有限公司 44202 |
代理人 |
刘宇峰 |
主权项 |
一种以CA19‑9 cDNA为模板制备RNA探针的方法,其特征在于,包括以下步骤:A.针对CA19‑9 mRNA序列筛选多个靶序列,对于每个靶序列设计至少一对引物,所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段,所述多重DNA片段能包括所有靶序列;B.从CA19‑9 cDNA质粒中,采用步骤A的所述引物,通过PCR扩增得到所述多重DNA片段,纯化后混合,作为模板;C.加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应,将UTP掺入产物,纯化后得到RNA探针。 |
地址 |
510663 广东省广州市广州科学城国际企业孵化器D区8楼 |