猪白细胞干扰素冻干粉针剂及其制备方法

摘要

本发明提供一种猪白细胞干扰素冻干粉针剂及其制备方法，所述冻干粉针剂是由猪白细胞干扰素原液和保护剂按20:4-3的体积比混合冻干制成，原液中包括以下成分：猪白细胞悬液、猪血清、启动干扰素、仙台病毒病毒液和培养液。经原料制备→混和→水浴搅拌诱导培养→离心收获→灭活病毒→解冻除菌→加入保护剂→冻干工序制成。其功能是作为一种广谱抗病毒药物，治疗猪瘟、猪病毒性腹泻、猪病毒性感冒等病毒性疾病。田间控制和推广治疗试验总治愈率为94.57％，人工控制治疗猪瘟和猪病毒性腹泻总治愈率为83.3％和100％。

主权项

猪白细胞干扰素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、猪白细胞干扰素原液的制备(1)猪白细胞悬液的制备：无菌采集健康猪鲜血，于4℃3000转/分的无菌条件下离心20分钟，吸取呈灰黄色的中间层白细胞至血浆瓶内，用0.85％NH₄Cl处理两次后离心，收集沉淀白细胞，用Hank′s液洗去残余NH₄Cl，用培养液将沉淀白细胞稀释成悬液；(2)猪血清的制备：无菌采集健康猪鲜血，自然析出，用0.2％CaCl₂处理血浆，除去其中的纤维蛋白，用澄清板K₇板澄清，除菌板EKS板除菌，置于‑20℃保存备用；(3)启动干扰素的制备：首次采用人白细胞干扰素作为启动干扰素，以后各次选用前批次效价最高的猪白细胞干扰素作为启动干扰素；(4)仙台病毒病毒液的制备：于36‑38℃受精鸡蛋孵化7‑15天后，接种仙台病毒，再孵化65‑79小时后，收获病毒液，该病毒液的血凝效价为1∶320‑1280，置于‑20℃保存备用；(5)培养液的制备：向粉剂1640中加入蒸馏水配制成1‑2％的1640溶液，加入谷氨酰胺，使1640溶液中谷氨酰胺的浓度为3％，再加入青链霉素，使1640溶液中青链霉素达100‑1000单位/毫升；(6)将猪白细胞悬液加入培养液中，使每毫升培养液中含4×10⁷‑1×10⁸个猪白细胞，然后向每5000毫升培养液中加入猪血清250‑350毫升，再加入启动干扰素，使每毫升培养液中含干扰素抗病毒活性50‑150单位，最后加入仙台病毒病毒液，每5000毫升培养液中加入病毒液350‑400毫升，得到混合液I；(7)将上述混合液I置于水浴搅拌装置中，以60‑80转/分的速度搅拌，30℃诱导培养6小时后，再于37℃诱导培养14小时，其中诱导培养2小时后，用5％NaHCO₃溶液调pH值7.2‑7.4，诱导培养6小时后，再用5％NaHCO₃溶液调pH值7.2‑7.4，在诱导培养开始的第8小时，5分钟内通入无菌氧0.2升，每隔2小时通一次无菌氧，连续5次；(8)将上述诱导培养后的液体于4℃，3000转/分无菌条件下离心10‑20分钟，收集含干扰素的上清液，用甲醛溶液灭活病毒，上清液中甲醛的终浓度为1‰，然后置于‑20℃冻存；(9)从‑20℃解冻后，离心取上清，无菌条件下先用澄清滤器澄清，然后用除菌滤器除菌，即得猪白细胞干扰素原液，于4℃保存；步骤二、保护剂的制备将蔗糖和脱脂牛奶溶于注射用水配制成混合液II，其中，蔗糖和脱脂牛奶的浓度分别为0.356kg/L和0.711kg/L；用200目纱网过滤，滤液于100℃蒸汽灭菌45min，即得保护剂；步骤三、猪白细胞干扰素冻干粉针剂的制备将上述制备的猪白细胞干扰素原液和保护剂按20:4‑3的体积比混合后冻干，即得猪白细胞干扰素冻干粉针剂，其中水分含量<4％；冻干操作步骤如下：真空冷冻干燥箱预冻至箱内温度‑40℃±2℃，保温210min，抽真空至前后箱压力≤10pa，真空度达99％以上；升华：第一次升华温度设为‑2℃，时间为1380min；第二次升华温度设为28℃，时间为60min；第三次升华温度设为‑35℃，时间为120min；第四次升华温度设为48℃，时间为30min；保温：最后保温时间为240min，抽真空前压力上升6.5‑7.5pa时，保温结束。