一种快速检测维生素D的试纸条

摘要

本发明公开了一种快速检测维生素D的试纸条，包括不吸水的支撑板，所述支撑板上依次设置有样品垫、结合垫、层析膜和吸收垫，所述结合垫上包被有标记物标记的维生素D与载体蛋白的偶联物，所述层析膜为硝酸纤维素膜，层析膜上设置有质控C线和检测T线，所述检测T线位于结合垫和质控C线之间，检测T线上包被有维生素D特异性抗体，质控C线上包被有能够与载体蛋白结合的特异性抗体。本发明的试纸条使用方便，操作简单，检测速度快，容易普及到基层医疗单位使用，满足市场需求，能够填补国内外市场空白，试纸条结果判断容易，用符号表示，摆脱了维生素D检测对设备、仪器以及人员的特殊要求。

主权项

一种快速检测维生素D的试纸条，包括不吸水的支撑板(1)，所述支撑板(1)上依次设置有样品垫(2)、结合垫(3)、层析膜(4)和吸收垫(7)，所述结合垫(3)上包被有标记物标记的维生素D与载体蛋白的偶联物，所述层析膜(4)为硝酸纤维素膜，层析膜(4)上设置有质控C线(6)和检测T线(5)，所述检测T线(5)位于结合垫(3)和质控C线(6)之间，检测T线(5)上包被有维生素D特异性抗体，质控C线(6)上包被有能够与载体蛋白结合的特异性抗体；所述维生素D特异性抗体为鼠抗维生素D单克隆抗体，维生素D特异性抗体的包被量为2μL，包被浓度为0.25mg/mL～5mg/mL；所述能够与载体蛋白结合的特异性抗体的包被量为2μL，包被浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，其特征在于，所述标记物标记的维生素D与载体蛋白的偶联物的制备方法包括以下步骤：步骤一、将1mg～10mg维生素D溶解于100μL有机溶剂中，然后在搅拌条件下向10mL浓度为0.1mg/mL～5mg/mL的载体蛋白溶液中逐滴加入溶解后的维生素D，再逐滴加入体积百分比浓度为50％的戊二醛水溶液至溶液中戊二醛的体积百分比浓度为1％～3％，搅拌5min～20min后移至4℃下搅拌反应16h～18h，反应后的反应液用PBS缓冲溶液在4℃下透析8h，透析过程中换液2～3次，透析物离心后取上清液，最后将上清液用0.45μm滤膜过滤，得到维生素D与载体蛋白的偶联物，‑20℃保存备用；步骤二、向标记物溶液中加入步骤一中所述维生素D与载体蛋白的偶联物至溶液中维生素D的终浓度为10μg/mL～1000μg/mL，搅拌5min后加入BSA溶液至BSA的质量体积百分浓度为0.1％～1％，在4℃下避光搅拌反应30min后加入聚乙二醇溶液至聚乙二醇的质量体积百分浓度为0.1％～1％，继续反应5min后离心，弃去上清，将沉淀复溶后得到标记物标记的维生素D与载体蛋白的偶联物。