一种兔皮肤真菌复合PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种兔皮肤真菌复合PCR检测方法，其特征在于,包括以下步骤：(1)疑似感染须癣毛癣菌、犬小孢子菌、絮状表皮癣菌的病料用热裂解法提取DNA；(2)合成Pa，Pb；Pc，Pd；Pe，Pf三对特异引物；(3)以病料DNA为模板，Pa-Pf3对引物混合为引物进行PCR扩增；(4)电泳检测PCR产物。本发明的有益之处在于：提供了一种兔皮肤真菌复合PCR检测方法，经过一次PCR就能鉴别3种皮肤真菌。较传统直接显微观察和病原分离培养等方法特异性强、敏感性高、省时；与其他分子生物学方法比，减少了PCR次数，也不需序列测定，具有简单、快速、经济等特点，且非常适合大规模样品检测。

主权项

一种兔皮肤真菌复合PCR非疾病诊断检测方法，其特征在于,包括以下步骤：(1)病料DNA提取：疑似感染须癣毛癣菌、犬小孢子菌、絮状表皮癣菌的病料采用热裂解的方法提取DNA；(2)引物的合成：须癣毛癣菌特异引物：Pa5'GCAAAGAAGCCTGGAAGAAG3'Pb5'GGAGACCATCTGTGAGAGTTG3'犬小孢子菌特异引物：Pc5'GACCGCCCGTCGCT ACTAT3'Pd5'TTCGCTGCGTTCTTCATTAG3'絮状表皮癣菌特异引物：Pe5'GAAGAAGATTGTCGTTTGCATCGTCTC 3'Pf5'CTCGAGGTCAAAAGCACGCCAGAG 3'；(3)复合PCR：以病料DNA为模板，Pa‑Pf 3对引物混合为引物进行PCR扩增；(4)PCR产物检测：采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,凝胶成像分析仪观察结果；步骤(3)中，PCR的反应体系为：Mixtures 10μL，三对引物Pa‑Pf最终浓度0.2mM，模板DNA 4μL，加ddH₂0至总体积20μL；在步骤(3)中，PCR循环参数为：94℃初始变性5min,94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环，72℃终延伸10min。