葡萄酒中多种吡唑类杀菌剂的固相萃取-液相色谱-串联质谱检测方法

摘要

本发明公开了一种葡萄酒中多种吡唑类杀菌剂的固相萃取-液相色谱-串联质谱检测方法，本发明能够同时测定葡萄酒中样品中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、联苯吡菌胺、呋吡菌胺6种吡唑类杀菌剂。在葡萄酒样品中加入超纯水稀释得到待检液，待检液经HLB固相萃取柱净化，使用C₁₈反相柱分离；目标分析物在多反应监测模式下以保留时间和离子对信息比较进行定性分析，外标法定量，本方法分析速度快、灵敏度高、重现性和准确度好，为评价葡萄酒样品质量提供了新的检测方法。

主权项

一种葡萄酒中多种吡唑类杀菌剂的固相萃取‑液相色谱‑串联质谱检测方法，其特征在于包括以下步骤：(一)待测样品的制备：称取4.7‑5.3g葡萄酒样本，葡萄酒样本中加入超纯水，混匀后得到待检液；（二）待检液的净化：将固定相萃取柱进行预处理，将步骤（一）制备的待检液上固定相萃取柱，经水和甲醇/水溶液淋洗除去杂质，再用洗脱溶剂洗脱固定相萃取柱上的戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、联苯吡菌胺、呋吡菌胺得到洗脱液，将洗脱液浓缩富集后，用甲醇溶剂稀释并经0.22μm微孔滤膜过滤后得到待测样品溶液，所述步骤（二）中的固定相萃取柱为Waters Oasis HLB SPE柱，并通过甲醇、水对SPE柱进行活化处理，所述步骤（二）中的淋洗溶剂为水和体积比为2/3的甲醇水混合溶液，洗脱溶剂为甲醇；（三）待测样品溶液的检测：分别配制戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、联苯吡菌胺和呋吡菌胺溶液阶梯浓度的混合标准工作溶液，该混合标准工作溶液的浓度为0.4 ng/mL、 1.0 ng/mL、2.0 ng/mL 、5.0 ng/mL 和10.0 ng/mL，将步骤（二）中的待测样品溶液和混合标准工作溶液在液相色谱‑串联质谱仪上分别进样，获得以标准溶液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、联苯吡菌胺和呋吡菌胺的浓度为横坐标，再以标准溶液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、联苯吡菌胺和呋吡菌胺的峰面积为纵坐标的工作曲线，还有获得可以确定母离子的戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、联苯吡菌胺和呋吡菌胺的一级质谱图，确定母离子后，采用子离子扫描获得二级质谱图，然后从二级质谱图中选取定量离子和定性离子，然后用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、联苯吡菌胺、呋吡菌胺的浓度，所述的步骤（三）中液相色谱‑串联质谱仪的检测参数为：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C₁₈反相柱；流速：0.25 mL/min；流动相：A为0.1%乙酸水溶液；B为乙腈；进样量：5μL；色谱柱温度：30 ℃；电喷雾离子源：负离子扫描，电压为4500V；离子源温度：450 ℃；雾化气压力：50 psi；辅助气流速：40 psi ；气帘气压力：20 psi ；碰撞气压力：20 psi。