多级溶剂萃取法在酶促合成异槲皮苷中的应用

摘要

多级溶剂萃取法在酶促合成异槲皮苷中的应用，将芦丁溶解在pH为9.0的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液溶液中，浓度为1g/L，加入体积为10%的离子液体[Bmim][BF₄]和橙皮苷酶液构成反应体系，在40℃下恒温振荡培养得到芦丁水解液，离子液体共溶剂体系芦丁水解液的pH在2.0～7.0之间；芦丁水解液与萃取剂混合，水浴恒温震荡后，进行溶剂萃取，有机相与水相的相比在0.2～2.0之间，时间为10～150min，之后采用多级逆流萃取公式计算理论级数，在达到完全萃取时，根据所需最少比例的萃取剂及理论级数来筛选出最佳萃取条件。该方法操作简便，工艺易行，降低生物反应后期纯化的难度和成本，提高产品回收率和纯度。

主权项

多级溶剂萃取法在酶促合成异槲皮苷中的应用，其特征在于萃取过程为：将芦丁溶解在pH为9.0的甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液溶液中，浓度为1g/L，分别加入溶液体积10％的离子液体[Bmim][BF₄]和18％的浓度为0.01g/mL的橙皮苷酶液构成反应体系，在40℃下恒温振荡培养得到芦丁水解液，取pH为6.0的芦丁水解液3mL于100mL锥形瓶中，加入3.6mL三乙酸甘油酯，有机相与水相的相比优选为1.2，30℃、130r/min于水浴恒温振荡器中振荡30min，倒入分液漏斗，待两相平衡后，HPLC检测萃相中和萃余相中的异槲皮苷之后采用多级逆流萃取公式计算理论级数，在达到完全萃取时，根据所需最少比例的萃取剂及理论级数来筛选出最佳萃取条件，多级逆流萃取理论级数N的计算公式可表示为：$log\frac{x_N-\frac{y_0}{D}}{x_f-\frac{y_0}{D}}=log(\alpha -1)-log({\alpha }^{N+1}-1)$其中，α表示萃取因子,D表示萃取分配系数，X_f为萃取前料液中被萃取组分的浓度，单位g/L，y₀为萃取前有机相中被萃取组分的浓度，单位g/L，X_N为料液从第一级进入，从第N级流出后萃余相中的被萃组分的浓度，单位g/L；经计算异槲皮苷的萃取效率为68.26％，萃取分配系数为1.79，萃取因子为2.15，当异槲皮苷的收率达到99％时，多级逆流萃取的理论级数为4级。