含抗稻瘟病基因重组DNA片段植株的选育方法

摘要

本发明提供一种含抗稻瘟病基因重组DNA片段植株的选育方法，即利用正向及负向选择标记、水稻全基因组育种芯片技术通过五世代获得背景与受体亲本‘空育131’完全一致，且仅含供体亲本‘K22’抗稻瘟病基因DNA片段的稳定的目标植株。另外本发明还提供利用该方法获得的一个抗稻瘟病基因重组DNA片段及其检测方法。

主权项

含抗稻瘟病基因重组DNA片段植株的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以水稻‘空育131’为轮回亲本，含抗稻瘟病基因DNA片段的‘K22’为供体亲本进行杂交和回交，获得BC₁F₁代；利用正向选择标记Pi2‑4和负向选择标记RM19814、RM19835对BC₁F₁代进行抗稻瘟病基因DNA片段单侧同源重组片段筛选，并用水稻全基因组育种芯片RICE6K对其进行背景选择；(2)选择背景回复较好的重组单株与受体亲本‘空育131’进行回交，获得BC₂F₁代，利用正向选择标记Pi2‑4对其进行检测，选择含有抗稻瘟病基因DNA片段的重组单株，然后用水稻全基因组育种芯片RICE6K对其进行背景选择；(3)选择背景回复好的重组单株再次与受体亲本‘空育131’进行回交，获得BC₃F₁代，利用正向选择标记Pi2‑4和负向标记RM19814、RM19835对BC₃F₁代进行抗稻瘟病基因DNA片段另一侧同源重组片段筛选，并利用水稻全基因组育种芯片RICE60K对其进行背景选择，筛选到导入目标片段小，且背景回复好的重组单株；(4)选中的重组单株自交一次，获得BC₃F₂代；利用正向选择标记Pi2‑4对BC₃F₂代进行检测，并利用水稻全基因组育种芯片RICE60K对其进行背景选择，最终获得目标基因组DNA片段纯合，且背景完全回复的含抗稻瘟病基因重组DNA片段的水稻植株；其中，所述抗稻瘟病基因重组DNA片段两侧的同源重组片段的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。