一种基于DAB显色的CPC乙酰化酶高通量筛选的方法

摘要

一种基于DAB显色的低温CPC乙酰化酶高通量筛选的方法，该方法基于对二甲氨基苯甲醛与7-ACA的复合物在405nm有最大吸收峰的原理，采用无菌的96孔板对重组菌进行低温低浓度诱导剂诱导表达，以稀碱溶液进行菌体裂解后利用磷酸二氢钠中和，然后再以96孔板进行底物的水解，经p-DAB显色后利用酶标仪进行产物的快速定量，进而实现CPC乙酰化酶突变体的高通量筛选。该方法具有筛选快速、操作简便、筛选通量大及准确度高等优点，能够加快CPC乙酰化酶改造的速度，有巨大的应用潜力和经济价值。

主权项

一种基于DAB显色的低温CPC乙酰化酶高通量筛选的方法，其特征在于：基于对二甲氨基苯甲醛与7‑ACA的复合物在405nm有最大吸收峰的原理，采用无菌的96孔板对重组菌进行低温低浓度诱导剂诱导表达，以稀碱溶液进行菌体裂解后利用磷酸二氢钠中和，然后再以96孔板进行底物的水解，经二甲氨基苯甲醛显色后利用酶标仪进行产物的快速定量，进而实现CPC乙酰化酶突变体的高通量筛选。