一种基于无酶免疫传感器检测微囊藻毒素-LR的方法

摘要

本发明涉及一种微囊藻毒素-LR(MC-LR)的无酶免疫传感器的制备及其检测方法，属于免疫分析化学技术领域。本发明在玻碳电极表面层层组装羧基化的碳纳米纤维和聚乙二醇，构筑高密度MC-LR抗原传感界面，合成金纳米粒子并制备金纳米粒子探针，采用间接竞争免疫分析原理，包被MC-LR抗原和MC-LR目标抗原竞争MC-LR抗体形成免疫复合物，将金纳米粒子探针与免疫复合物进行反应，电极表面键合的金纳米粒子氧化生成AuCl₄^-，通过电化学测定AuCl₄^-还原峰峰电流值的大小达到检测MC-LR的目的。本发明有利于高灵敏在线检测MC-LR，水样不必提纯处理，简单快速，检测体系无需酶的使用，降低了检测成本。

主权项

一种基于无酶免疫传感器检测微囊藻毒素‑LR的方法，其特征在于：所述的方法为，(1)羧基化碳纳米纤维修饰电极的制备；(2)聚乙二醇的修饰；(3)MC‑LR抗原的修饰；(4)金纳米粒子探针的制备；(5)将5μL不同浓度的MC‑LR抗原标准溶液与5μL的MC‑LR抗体溶液混合制备成温育液，将所得温育液滴涂到步骤(3)制备的MC‑LR免疫传感器表面，并置于25℃湿盒中温育1h后，用0.01M的pH为7.4的PBST冲洗，保存于4℃备用；(6)将10μL步骤(4)制备的金纳米粒子探针的分散液滴涂到经过步骤(5)处理的电极表面，并置于25℃湿盒中温育1h后，用0.01M的pH为7.4的PBST冲洗，保存于4℃备用；(7)电化学检测体系的构建；(8)标准曲线的绘制利用间接竞争免疫原理，建立还原峰峰电流值‑MC‑LR浓度标准曲线；(9)实际样品的检测重复步骤(1)至步骤(7)的操作，只是将步骤(5)中所述的5μL不同浓度的MC‑LR抗原标准溶液替换为5μL的待测水样；并根据步骤(8)中的方法进行电化学检测，根据测定到的还原峰峰电流值对应步骤(8)中建立的标准曲线，得出实际水样中MC‑LR的浓度。