丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒及方法

摘要

本发明涉及一种疾病病原体基因检测技术，尤其涉及一种丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒及方法，可用于检测国内发生的丙型肝炎病毒的型别1a，1b，2a，2b，3a，6a感染的辅助诊断。本发明采用尼龙膜载体，针对HCV不同基因型设计寡核苷酸探针，制备成基因芯片，再配以PCR引物以及其他组分，可以快速准确对血液样品中丙型肝炎病毒进行分型。本发明的丙型肝炎病毒基因分型的基因芯片和试剂盒及方法具有快速、灵敏、准确、高通量的特点，一次杂交反应可以检测多种靶序列，取材方便，无需特殊设备，仪器投入低，具有快速简便、敏感度高和特异性强的特点。

主权项

丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒，主要包括PCR反应液和DNA杂交膜条，其特征在于，所述DNA杂交膜条包括尼龙膜，所述尼龙膜上固定有探针，所述探针为可分别与丙型肝炎病毒各种亚型病毒的核酸杂交的核苷酸，所述探针序列如下所示：针对HCV1a型设计探针Y1：5’‑AATTGCCAGGACGACCGG‑3’；针对HCV1b型设计探针Y2：5’‑AATTGCCAGGATGACCGGG‑3’；针对HCV1b型设计探针Y3：5’‑CCCGGAATTGCCAGGAC‑3’；针对HCV2a型设计探针Y4：5’‑CAATGCCTGGAGATTTGGGCG‑3’；针对HCV2a型设计探针Y5：5’‑CAATGCCTGGAGATTTGGGC‑3’；针对HCV2b型设计探针Y6：5’‑CTCAATGCCTGGAGATTTGG‑3’；针对HCV2b型设计探针Y7：5’‑GCTCAATGCCTGGAGATTTGG‑3’；针对HCV3a型设计探针Y8：5’‑CAATGCCTGGAGATTTGGG‑3’；针对HCV3a型设计探针Y9：5’‑CGAGGTAGACGTCAGCC‑3’；针对HCV3a型设计探针Y10：5’‑ACCTCGAGGTAGACGTCAGCC‑3’；针对HCV6a型设计探针Y11：5’‑AACCTCGAGGTAGACGTCAGCC‑3’；针对HCV6a型设计探针Y12：5’‑GCAACCTCGAGGTAGACGT‑3’；针对HCV6a型设计探针Y13：5’‑TAGACGTCAGCCTATCCCCAA‑3’；针对HCV1‑6型设计通用探针Y14：5’‑TAGACGCCAGCCTATTCCCA‑3’；阴性探针HN:5’‑GGTCCTGTTTAACTGGCG‑3’；所述各探针5’端进行氨基标记以与尼龙膜偶联。