西南远志的组织培养方法

摘要

本发明涉及植物组织培养领域，主要涉及的是西南远志的组织培养方法。本发明所述的西南远志的组织培养方法由以下步骤组成：一、外植体的选择；二、外植体的消毒；三、初始诱导培养；四、原球茎增殖培养；五、原球茎分化培养；六、壮苗和生根培养。本发明用少量的种子作为外植体，快速大量的培育出西南远志种苗。采用无汞消毒法进行灭菌处理，即保证了外植体无菌污染，提高其培养成活率，又可以避免汞污染；在培养基中加入维生素C、核黄素为抗氧化剂，减轻了外植体的褐化和玻璃化，提高了外植体的成活率。本发明操作简单，成本低廉，成活率高、生根率高。

主权项

一种西南远志的组织培养方法，其特征在于由以下步骤组成：一、外植体的选择：选择健壮的野生西南远志，用其种子作为外植体；二、外植体的消毒：先用自来水冲洗外植体8～12min，然后采用无汞消毒法用60～75％的乙醇溶液消毒30～60秒，用无菌水冲洗3～5遍，按重量比例1:2～2.5将高锰酸钾和甲醛溶液放入玻璃干燥器的底层，随即把外植体放入玻璃干燥器隔层瓷板上，盖好盖子熏消毒1～2小时，再用浓度为3～6％的次氯酸钠消毒10～15min，消毒完成后，再用无菌水冲洗4～6遍；三、初始诱导培养：把外植体接种于下列经改良的无菌诱导培养基中，所述的改良的无菌诱导培养基为：在每升KC培养基中加入KT 1.0～1.5mg、NAA 0.4～0.8mg、VB₂ 5～20mg、活性炭1～1.5g、重量百分比浓度为10～15％的马铃薯汁100～150g，在温度25～28℃、光照强度1000～15001x、光照时间为10～12个小时的条件下，培养55～65天，形成圆球茎；四、原球茎增殖培养：将上述的生长良好的圆球茎转接入下列增殖培养基中，所述的培养基为：在每升KC培养基中加入NAA 1.5～2.0mg、KT 0.5～0.8mg、VC 10～30mg、VB₂ 5～20mg、重量百分比浓度为10～15％的马铃薯汁100～150g、蔗糖30g、活性炭3～5g、琼脂6～8g,在pH值为5～7.0条件下培养，培养周期：55～65天，培养温度：25～28℃，光照时间:10～24小时/天，光照强度1000～15001x；五、原球茎分化培养：将步骤四所述的圆球茎转入下列分化培养基中，所述的分化培养基为：在每升KC培养基中加入NAA 0.8～1.0mg、KT 0.1～0.5mg、VC 10～30mg、VB₂ 5～20mg、活性炭3～5g、重量百分比浓度为10～15％的香蕉汁100～150g、琼脂6～8g，在温度25～28℃、光照强度1000～15001x、光照时间10～12小时条件下培养55～65天，得到分化苗；六、壮苗和生根培养：将分化苗转入下列生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养基为：在每升1/2KC培养基中加入NAA 0.8～1.0mg、VC 10～30mg、VB₂ 5～20mg、活性炭3～5g、重量百分比浓度为10～15％的香蕉汁100～150g、琼脂6～8g，在温度25‑28℃、光照时间10～12小时、光照强度1000～15001x条件下培养55～65天，得到生根苗。