| 主权项 |
一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)蜂蜜中总蛋白的提取：分别称取中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜，各放于离心管中，各加无菌水，震荡混匀，离心机4℃条件下8000g/min离心，吸取上清液至新的离心管中，将上清液置于4℃冰箱预冷，加入无水乙醇，在冰水浴中温和搅拌，然后在4℃条件下离心，弃去上清液，沉淀加无菌水，搅拌混匀，后分装到离心管中置于‑80℃冰箱备用，来自不同蜂种的蜂蜜用不同标识标记；(2)样品蛋白浓度测定：用蛋白浓度测定试剂盒测定样品蛋白浓度；(3)蛋白样品的处理：分别取中蜂蜂蜜蛋白样品和意蜂蜂蜜蛋白样品于离心管中，各加入蛋白上样缓冲液，震荡混匀后95℃恒温金属浴变性10分钟；(4)聚丙烯酰胺凝胶的制备：采用的分离胶浓度为12％，浓缩胶为5％，胶条厚度1.5mm；(5)蜂蜜蛋白样的电泳：采用蛋白电泳分离系统，两种蛋白上样量均为200μg，初始电压为90V，蛋白进入分离胶后改为150V至电泳结束，并加入蛋白Marker以指示蛋白分子量大小；(6)胶条的处理：电泳结束后胶条放入固定液中固定1小时，中间更换一次固定液，固定完成后用考马斯亮蓝R‑250染液染色3小时，然后置于脱色摇床上脱色至条带清晰；(7)目标蛋白条带的识别：中蜂蜂蜜蛋白在15.0KDa、意蜂蜂蜜蛋白在16.5KDa有特异性条带，根据标准蛋白Marker指示，比对蜂蜜蛋白条带结果，达到鉴别目的。 |
