发明名称 |
利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法 |
摘要 |
本发明提供一种利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法,包括:在牛乳加入水和胰蛋白酶和胃蛋白酶进行酶解,灭酶后经喷雾干燥得粉状酪蛋白水解物;酪蛋白水解物通过等电点沉淀分离;采用反相钢柱,将电点沉淀所得纯化物通过制备液相,再次对样品进行分离纯化,根据样品极性的不同,将样品分为若干段,通过建模,对该促睡眠粗体物进行活性评价;采用全细胞膜片钳技术,给予30-60PA,3000-4000ms诱发动作电位,给药100-150μmol/L,记录电生理图谱,通过放电数目和频率,筛选出具有较好促睡眠的活性片段。本发明操作简单,分离效果好,所得粗提取不仅可以缩短入睡的时间,还可以调节睡眠节律,为失眠症患者的健康提供更好的保障。 |
申请公布号 |
CN105548531A |
申请公布日期 |
2016.05.04 |
申请号 |
CN201510915215.0 |
申请日期 |
2015.12.14 |
申请人 |
华南农业大学 |
发明人 |
曹庸;陈媛媛;苗建银;陈云娇;刘又豪;彭勃;孙圣伟 |
分类号 |
G01N33/487(2006.01)I;G01N1/34(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/487(2006.01)I |
代理机构 |
张家界市慧诚商标专利事务所 43209 |
代理人 |
高红旺 |
主权项 |
一种利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)在容器中加入水,升温至40℃‑60℃,加入牛乳和蛋白酶进行酶解,酶解条件为:水和牛乳体积比为100:10‑15、pH值7.5‑8.5、时间2‑4h,所述蛋白酶为胰蛋白酶和胃蛋白酶,胰蛋白酶的加入量为牛乳质量的0.2%‑0.6%,胃蛋白酶的加入量为牛乳质量的0.06%‑0.12%,酶解完成后,灭酶,喷雾干燥,得粉状酪蛋白水解物;(2)酪蛋白水解物通过等电点沉淀分离,条件为pH4.5‑6、乙醇浓度60%‑90%、沉淀时间为1‑3h;(3)采用反相钢柱,将步骤(2)所得沉淀物通过制备液相,再次对样品进行分离纯化,根据样品极性的不同,将样品分为若干段,通过建模,对该促睡眠粗体物进行活性评价;(4)急性分离大鼠的下丘脑腹外侧视前区脑片,厚度约300‑500um,然后采用全细胞膜片钳技术,借助去极化方波,给予30‑60PA,3000‑4000ms诱发动作电位,给药100‑150 μmol /L,记录电生理图谱,通过放电数目和频率,筛选出具有较好促睡眠的活性片段。 |
地址 |
510642 广东省广州市天河区五山路403号华南农业大学 |