一种处理畜禽养殖污水的复合生物菌剂及其制造方法

摘要

本发明涉及一种处理畜禽养殖污水的复合生物菌剂及其制造方法，属于环境生物技术领域。本发明的微生物菌株为解淀粉芽孢杆菌IAE（Bacillus amyloliquefaciens IAE）、棘孢木霉12（Trichoderma asperellum 12）和苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。本发明适用于污水排放量较大的畜禽养殖业的污水处理，能够通过微生物分解、絮凝大颗粒固体物质（包括蛔虫卵等有害生物）、杀灭蚊蝇的有害生物、减少臭气排放等方式处理养殖业污水。处理后的污水固体悬浮颗粒、COD显著降低，污水处理后作为液体有机肥或者清水混合灌溉用水能够有效的降低施用土壤的负载，减少对土壤的污染，有效缓解集约化养殖在一定时空产生高浓度污水导致周围土壤难以消纳的难题。

主权项

一种畜禽养殖污水处理复合生物菌剂，其特征为复合生物菌剂含有解淀粉芽孢杆菌(IAE Bacillus amyloliquefaciens IAE)、棘孢木霉12(Trichoderma asperellum 12)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)；其中所述的解淀粉芽孢杆菌IAE( Bacillus amyloliquefaciens IAE)，于2013年3月15日保藏于中国典型微生物菌种保藏中心，保藏地址为武汉市武昌珞珈山，保藏编号CCTCC NO：M 2013086，简称为解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086；所述的棘孢木霉12 (Trichoderma asperellum 12)，于2013年5月16日保藏于中国典型微生物菌种保藏中心，保藏地址为武汉市武昌珞珈山，保藏编号CCTCC NO：M 2013213，简称为棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213；将所述的解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086、棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213和苏云金芽孢杆菌发酵液按照10：8：1的体积比复合；所述的发酵液，按如下步骤制备获得：1）将解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086菌株接种到液体种子培养基，培养的条件为：摇床震荡170rpm，培养温度37℃，培养24小时，菌落形成单位≥1×10⁹ cfu ml^‑1；所用的液体种子培养基配方为，按照1L培养基配制：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 10g，自来水1000ml，pH范围7.0‑7.5，121℃灭菌20min；将解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086种子按照5%体积百分比接种到液体发酵培养基，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：培养温度28~35℃，溶氧通气量范围为30～100％，150~220rpm，发酵后期发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×10⁹ cfu ml^‑1，发酵液低温储存备用；所用的液体发酵培养基的配方为：葡萄糖80g，谷氨酸钠50g，(NH₄)₂SO₄ 8g，NaCl 5g，K₂HPO₄·3H₂O 2g，MnSO₄·7H₂O 0.25g，MnSO₄·H₂O 0.03 g，蒸馏水1000ml，pH值自然，115℃灭菌30min；2）棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213接种到PDA培养液中，进行液体种子培养，培养条件为：摇床震荡120rpm，培养温度25℃，培养72小时，菌落形成单位≥0.5×10⁸ cfu ml^‑1；所用的液体的种子PDA培养基的配方为，按照1L培养基配制：用200 g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮30 min，用纱布过滤后，滤液加20 g普通蔗糖，定容至1000 ml，pH值自然，115℃灭菌30 min；将棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213种子按照10%体积百分比接种到液体发酵培养基，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：初始pH自然，培养温19~22℃，溶氧通气量范围为30～100％，90~170rpm，发酵中后期形成菌丝球用转速250rpm搅拌打碎成菌丝片段，发酵棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213菌株的菌落形成单位≥0.5×10⁸ cfu ml^‑1，发酵液低温存贮备用；所用液体发酵培养液配制方法为：用100 g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮30 min，经过滤后滤液中加5g普通蔗糖和2g水稻秸秆粉，定容至1000 ml，pH值自然，115℃灭菌30 min；3）苏云金芽孢杆菌接种到液体种子培养基，培养条件为：摇床震荡170rpm，培养温度37℃，培养24小时，菌落形成单位≥1×10⁹ cfu ml^‑1；所用的液体的种子培养基的配方为，按照1L培养基配制：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 10g，自来水1000ml，pH范围7.0‑7.5，121℃灭菌20min；将苏云金芽孢杆菌种子按照5%体积百分比接种到液体发酵培养基，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：初始pH范围为7.0~7.5，培养温度25~33℃，溶氧通气量范围为30～100％，150‑220rpm，发酵后期发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×10⁹ cfu ml^‑1，发酵液储存备用；所用的液体发酵培养基的配方为，按照1L培养基配制：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 10g，自来水1000ml，pH范围7.0‑7.5，121℃灭菌20min；4）将微生物发酵液菌种按照解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086：棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213：苏云金芽孢杆菌=10：8：1体积比复合，用氢氧化钙调节PH值为8.0~8.5， 后继续搅拌机搅拌0.5~1小时让微生物菌体稳定和进入休眠状态，复合物在常温静置2小时，灌装，即为一种畜禽养殖污水处理复合生物菌剂。