一种鸭肝炎病毒琼扩抗原及其制备方法与应用

摘要

本发明提供了一种鸭肝炎病毒琼扩抗原及其制备方法与应用，所述琼扩抗原是将鸭肝炎病毒接种大量麻鸭胚进行培养增殖，收集胚尿囊液，通过低温超速离心进行病毒的浓缩，并通过蔗糖梯度离心及超速离心进行病毒纯化获得的鸭肝炎病毒琼扩抗原；通过条件优化，确定了最佳抗原和抗体反应浓度，通过特异性试验、重复性试验和灵敏性试验证实该方法简单可行，本发明利用所述琼扩抗原建立的鸭肝炎病毒抗体检测方法具有特异性强、稳定性好、敏感性高等特点，为鸭肝炎病毒抗体提供了简单、特异、灵敏、成本低廉和实用的检测方法。

主权项

一种鸭肝炎病毒琼扩抗原，其特征在于：是由下述方法得到的：(1)病毒繁殖：将第5代Ⅰ型和第8代Ⅲ型鸭肝炎病毒接种10日龄非免疫麻鸭胚，收获72小时至96小时内死亡鸭胚尿囊液，放于4℃保存；(2)病毒灭活：将收集的尿囊液经终浓度2‰甲醛混合混匀，于37℃摇床内灭活24小时；(3)病毒浓缩：将灭活好的尿囊液于4℃、8000r/min离心45min，取上清，再于4℃、45000r/min离心2h，弃上清后沉淀用灭菌生理盐水重悬，得到病毒浓缩液，储存于‑70℃；(4)病毒纯化：制备10％、20％、30％、40％和50％5个梯度的蔗糖平衡液，在10％蔗糖液上加上病毒浓缩液，于4℃、40000r/min水平离心3h后，收集病毒带，于4℃、45000r/min离心2h后，弃上清后沉淀用灭菌生理盐水重悬，用RT‑PCR的方法检测各带的病毒含量，以40％带病毒含量最大，作为为琼扩抗原，储存于‑70℃，即得。