一种快速提取植物组织总RNA的方法

摘要

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种快速提取植物组织总RNA的方法，包括：研钵用酒精烧后并用液氮快速预冷，加入交联聚乙烯基吡咯烷酮和植物组织于研钵中，用液氮充分研磨后，再加入预热的CTAB提取液和巯基乙醇进行细胞裂解，然后经氯仿抽提，用等体积的高浓度LiCl快速沉淀得到总RNA。该方法能够有效地控制RNase对RNA的降解、酚类物质以及多糖的干扰，并且用时较短，成本较低、效率高，且所提取的RNA纯度和完整性好，能够满足对高纯度的RNA的需求，具有巨大的应用前景。

主权项

一种快速提取植物组织总RNA的方法，其特征是，包括以下步骤：1）研钵洗净后，用酒精灼烧研钵，然后用液氮迅速预冷，将交联聚乙烯基吡咯烷酮（PVPP）和植物组织按照1:1~1:5（w/w）的比例置于上述研钵中，并用液氮研磨成粉末；取0.1‑0.3 g的上述粉末置于2ml离心管中，加入10μl β‑巯基乙醇和1ml预热CTAB提取液，震荡混匀，于55‑68℃下水浴20‑30分钟，冷却至室温；2）在步骤1）所述的离心管中直接加入1ml氯仿，充分震荡后，常温下，12000rpm离心5min；取上清，加入等体积氯仿，充分震荡后，4℃，12000rpm离心10min，取上清，按照同样的条件重复抽提一次；3）取上清，加入等体积8M LiCl，常温下沉淀1‑2h，12000rpm离心10min，彻底弃上清，保留沉淀；4）在上述沉淀中加入75%乙醇浸泡5‑10min，上下颠倒洗涤，8000rpm离心5min，彻底弃上清，重复洗涤1‑2次，所得沉淀于室温下风干10‑15min至无酒精残留，再加入20‑30μl DEPC处理水溶解，‑20℃保存。