一种羊肉源性成分核酸的恒温扩增检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种羊肉源性成分核酸的恒温扩增检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包含恒温扩增反应液、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒特异性高、灵敏度高；核酸扩增反应全部恒定同一温度，恒温扩增仅需30分钟，核酸试纸条检测结果需1-2分钟，全程从接受样品到获得结果整个检测过程仅需40分钟左右，且整个反应过程只需一个恒温仪器，特别适合羊肉源性成分核酸的现场快速检测。

主权项

一种羊肉源性成分核酸的恒温扩增检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括下列组成：(1)恒温扩增反应液，包括：正向外围引物、反向外围引物、一条探针、两条环引物、两条扩增交叉引物、1×Thermol Buffer，MgSO₄，dNTPs溶液，Bst DNA聚合酶和无菌双蒸水；所述正向外围引物为：5′‑GCAAACCCACTTAACACTC‑3′；反向外围引物为：5′‑AGGTCGGCTACTAGGATTC‑3′；所述两条环引物的序列分别为：正向：5′‑GCGTACGCAAATAGGAAGTATCA‑3′；反向：5′‑ACATCAAAGCAACGGAGCATAA‑3′；所述两条扩增交叉引物分别为：扩增正向引物：5′端Biotin标记5′‑GGACTCCTCCTAGTTTATTAGGGAT‑CCCTCACATCAAACCTGAA‑3′；扩增反向引物：5′‑GTCCTAGTAATTATACCCCTCCTCC‑ATTGACTGATTGGTCGGAAT‑3′；探针：5′端标记Fitc：5′‑Fitc‑TCGCCCTAATCCTCTCAATCCT‑3′；(2)阳性对照：含有羊属特异性的细胞色素b基因Cytb的DNA质粒；(3)阴性对照：无菌双蒸水。