一种辣椒花药培养获得单倍体再生植株的方法

摘要

本发明涉及一种辣椒花药培养获得单倍体植株的方法，属于农业技术领域。包括选取花蕾，花蕾消毒，花药接种，预处理，花药培养，诱导愈伤组织再分化为单倍体植株。本发明采用固体培养基将小孢子和花药壁共培养，低温、热激预处理，调节愈伤诱导、分化培养基成分和培养条件，提高了愈伤率和愈伤组织的分化能力。应用此方法进行辣椒花药培养，愈伤诱导率60％以上，出苗率80％以上，解决了辣椒花药培养诱导率低的难题。本发明可快速获得单倍体再生植株，出苗率高，为新品种选育提供有力的手段。

主权项

一种辣椒花药培养获得单倍体再生植株的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取花粉发育处于单核中后期的花药；（2）接种至预处理培养基上，预处理；（3）将预处理后的花药，在24℃～28℃条件下暗培养6~7d至花药顶端出现黄白色组织后，转接至愈伤组织诱导培养基，在昼温25±1℃/夜温22±1℃、光照2000～3000LX、光周期14h•d^‑1条件下培养20~30d获得愈伤组织；（4）将愈伤组织转接至1/2MS分化培养基上，在昼温25±1℃/夜温22±1℃、光照3000～4000LX、光周期16h•d^‑1条件下分化培养至愈伤组织直径为1~2cm，然后转接至MS分化培养基继续培育获得再生植株；（5）移栽；所述的愈伤组织诱导培养基为MS +0.1mg•L^‑1～0.25mg•L^‑1 2,4‑D+1.0mg•L^‑1～3.0mg•L^‑1 KT+2%～3%蔗糖+0.6%～0.8%琼脂，pH5.8～6；所述1/2MS分化培养基为1/2MS+0.01mg•L^‑1～0.02mg•L^‑1 NAA+4.0mg•L^‑1～6.0mg•L^‑1 KT+1.0 mg•L^‑1～5.0 mg•L^‑1 VC+2%～3%蔗糖+0.6%～0.8%琼脂，pH5.8～6；所述的MS分化培养基为MS+0.01mg•L^‑1～0.02mg•L^‑1 NAA+6.0mg•L^‑1～8.0mg•L^‑1 KT+5.0 mg•L^‑1～10.0 mg•L^‑1 VC +2%～3%蔗糖+0.6%～0.8%琼脂，pH5.8～6；所述的预处理培养基为MS+0.1 mg•L^‑1～0.2mg•L^‑1 2,4‑D+0.5 mg•L^‑1～1.0mg•L^‑1 KT+2%～3%蔗糖+0.6%～0.8%琼脂，pH5.8～6。