主权项 |
一种固定化脂肪酶催化合成绿原酸植物甾醇酯的方法,其特征在于具体制备步骤为:(1)选取200~300g干燥后的玉米,将其研磨,过100~120目筛得玉米粉末,将玉米粉末加入5L反应釜中,并向反应釜中加入总质量5~8%复合酶,再按固液比1:10~1:15加入质量浓度15%盐酸溶液,混合搅拌均匀,将反应釜升温至45~60℃,进行酶解3~5h,将酶解液过滤取滤渣,所述的复合酶是按质量比3:2的纤维素酶和蛋白质酶进行混合;(2)将上述得到的滤渣用榨汁机榨出多余水分,将榨完后的滤渣用超临界CO<sub>2</sub>在室温下进行萃取,萃取压力为5~20MPa,二氧化碳流量为160~180kg/h,萃取1~2h后,从流体相中分离得到甾醇固体,留取,备用;(3)取50~60g菊花花瓣,先粉碎过60~80目筛,再将粉末置于300~500mL质量分数85%乙醇溶液中,搅拌后移入超声提取装置中,在60~65℃和80~120W下进行提取2~3h,得提取液,将提取液在4000~5000r/min转速下离心分离,取上清液,将上清液移入圆底烧瓶中,用旋转蒸发仪在50~55℃下蒸发浓缩至乙醇完全去除,将浓缩液转移到分液漏斗中,按体积比1:2加入石油醚进行脱色2~3次,分层得水相,再用乙酸乙酯萃取3~5次,取下层液体,即为绿原酸;(4)取2~3g步骤(2)的甾醇于250mL锥形瓶中,按固液1:2~1:6向瓶中加入上述绿原酸,搅拌混合后再加入总质量4~10%固定化脂肪酶为催化剂、0.1~0.3g二十六烷为内标和40~50mL甲醇为溶剂,将锥形瓶放入恒温振荡器中,在40~65℃和80~120r/min下进行酯化反应3~5h;(5)将上述酯化反应后的混合物按体积比1:5~1:8溶于正己烷中,用硅胶柱层析分离,分离后收集洗脱液,并在65~70℃进行旋转蒸发,得到绿原酸甾醇酯浓缩液,将浓缩液在45~55℃下干燥6~8h得到绿原酸甾醇酯粉末状固体。 |