一种采用低渗透压收获液收获病毒的方法

摘要

本发明提供了一种采用低渗透压收获液收获病毒的方法。本发明的收获液渗透压为0～150mOsmol/kg，其配方为磷酸二氢钾和磷酸氢二钠或在此基础上添加氯化钠和/或蔗糖；或者选用稀释后的细胞培养基或细胞缓冲液PBS作为低渗收获液。本发明的低渗收获液裂解细胞能在10-60分钟内使细胞发生明显膨胀，震摇后细胞裂解比例为100%，且收获的病毒液滴度与现有技术相仿，无降低。本发明方法能够高效裂解细胞，使胞内病毒释放并得到有效收集，打破了在大规模平面培养病毒工艺中由于收获工艺的限制带来的壁垒。通过改变细胞渗透压的方式收获病毒的工艺方法操作简单，便于规模化生产，可有效提高产业化能力。

主权项

一种适用于细胞工厂的、采用低渗透压收获液收获病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)在病毒培养环境中，当细胞出现病变CPE程度大于50％时，弃去细胞培养液，加入用于破碎细胞收获病毒的低渗透压收获液，室温静置5‑30min；(2)显微镜下观察细胞状态，待细胞发生明显膨胀时震摇使细胞脱落，收集病毒液；其中所述的用于破碎细胞收获病毒的低渗透压收获液的渗透压为0～60mOsmol/kg，所述的用于破碎细胞收获病毒的低渗透压收获液含有如下组分：0.0026％‑0.052％的磷酸二氢钾、0.029％‑0.58％的磷酸氢二钠、0‑0.34％的氯化钠和0‑1％的蔗糖，前述％均为质量体积比,单位为g/ml；其中所述病毒是胞内病毒，选自水痘病毒、轮状病毒、EV71病毒、CA16病毒或甲肝病毒。