一种非诊疗目的禽肿瘤性病毒多重PCR检测方法

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种针对禽肿瘤性病毒的非诊疗目的多重PCR检测方法，可以同时检测REV、MDV、ALV-J和ALV-A病毒，主要通过研究上述四种病毒的特性，分别采用4对特异性引物进行多重PCR反应，通过对反应体系和条件进行优化，筛选出最适反应条件，建立了能够同时检测四种病原的多重RT-PCR方法，用并于临床样品检测判定上述四种病毒是否存在，并且与病理组织切片观察法对照，准确率达95％，整个检测方法敏感性高、特异性好、操作简便、迅速。

主权项

一种非诊疗目的禽肿瘤性病毒多重PCR检测方法，其特征在于，针对REV、MDV、ALV‑J和ALV‑A病毒的保守基因采用了4对特异性引物，其序列如下表所示：利用上述4对引物对待测物进行多重PCR扩增反应，其多重PCR扩增反应体系如下，每25μL体系为：多重PCR反应条件为：放入PCR仪中心，以尽量避免边缘效应，编辑程序如下：第一步：95℃15min；第二步：95℃30s、53℃1min30s、72℃1min30s，连续35‑40个循环；第三步72℃10min；最后保存于4℃；PCR反应完成后，向反应液中加入6×上样缓冲液，配置加入核酸染色剂的1.5％的琼脂糖凝胶进行核酸电泳，即可检测获得结果。