一种以CRISPR/Cas9基因编辑技术打靶Badh2基因获得香稻品系的方法

摘要

本发明公开了一种以CRISPR/Cas9基因编辑技术打靶Badh2基因获得香稻品系的方法，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术分别将香味基因各个外显子及内含子处能被Cas9识别的序列打靶，然后对基因组DNA序列切割后引发DNA修复，从而产生缺失突变，获得功能缺失的Badh2基因。将籼稻、粳稻和糯稻的愈伤组织作为遗传转化的受体材料：用成熟胚、幼穗和子房等为外植体诱导获得二倍体愈伤组织，用农杆菌介导法将打靶载体导入愈伤组织细胞，筛选、鉴定阳性植株，从T1群体分离得到香稻品系；用花药、花粉和未受精子房等为外植体诱导获得单倍体愈伤组织，用农杆菌介导法将打靶载体导入到愈伤组织的细胞中，筛选阳性愈伤，用秋水仙素加倍，分化成苗，鉴定遗传转化阳性植株，最终得到香稻品系。

主权项

一种以CRISPR/Cas9基因编辑技术打靶Badh2基因获得香稻品系的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术分别将香味基因各个外显子及内含子处能被Cas9识别的序列打靶，然后对基因组DNA序列切割后引发DNA修复，从而产生缺失突变，获得功能缺失的Badh2基因；S2，将粳稻、籼稻和糯稻的愈伤组织作为遗传转化的受体材料：用成熟胚、幼穗和子房等为外植体诱导获得二倍体愈伤组织，用花药、花粉和未受精子房等为外植体诱导获得单倍体愈伤组织，用农杆菌介导法将打靶载体导入愈伤组织细胞；S3，将打靶载体导入到二倍体愈伤组织的细胞中，筛选阳性愈伤，分化成苗，鉴定遗传转化阳性植株，从T1群体分离得到香稻品系；将打靶载体导入到单倍体愈伤组织的细胞中，筛选阳性愈伤，用秋水仙素加倍，分化成苗，鉴定遗传转化阳性植株，最终得到香稻品系。