一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法

摘要

本发明涉及一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法，属植物组织培养领域，包括如下步骤：培养基配制、外植体选取与消毒、鳞茎萌发、不定芽诱导及增殖、生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基为MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂粉8～9g/L，培养基pH为5.6～5.8；鳞茎萌发培养基为MS+6-BA 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L；不定芽诱导培养基为MS+6-BA 3.0～6.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L；不定芽增殖培养基为MS+6-BA 0.5～2.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L；各阶段养条件为,培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m^-2·s^-1。本发明的优点：建立的花叶紫娇花快繁体系种苗繁殖速度快，健壮均匀，变异少，移栽成活率高，适合花叶紫娇花种苗规模化生产。

主权项

一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)、外植体的选取及处理：从花叶紫娇花根部将鳞茎连根切下，剪去上部叶片和下部根，保留鳞茎长度2～3cm，剥去外表面1层表皮；2)、鳞茎萌发：在超净工作台上，将经过表面消毒的花叶紫娇花鳞茎转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去鳞茎表面水分，稍切去两端部分组织后将鳞茎接种于萌发培养基MS+6‑BA 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L中进行培养，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μmol·m^‑2·s^‑1；3)不定芽诱导：将获得的长出新叶，3～5cm高的无菌苗在无菌工作台上从鳞茎中间一分为二剖开后接种到不定芽诱导培养基MS+6‑BA 3.0～6.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L中，进行不定芽的诱导，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μmol·m^‑2·s^‑1；4)不定芽增殖：在无菌工作台上，将诱导获得的簇生、2～3cm高的不定芽从基部以2～3个连体不定芽为接种单位进行分离，接种于不定芽增殖培养基中增殖，不定芽增殖培养基为MS+6‑BA 0.5～2.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μmol·m^‑2·s^‑1；5)、不定芽生根诱导：在无菌工作台上，将高生长到3～4cm的丛生不定芽从基部切开成单个，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μmol·m^‑2·s^‑1；6)、组培苗驯化及移栽：不定芽基部长出2～3条2～3cm的不定根后，将生根苗移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养1～2d，将花叶紫娇花生根植株小心从培养瓶中取出，用自来水洗净组培苗表面的培养基，将花叶紫娇花组培苗，栽入基质中，保湿90％以上培养15d，然后在温室中正常培养；基本培养基选用MS培养基，蔗糖用量为25～30g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8～9g/L，培养基pH分装前调整为5.6～5.8。