一种山豆根毛状根的快速繁殖方法

摘要

一种山豆根毛状根的快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)取山豆根种子进行消毒后接种到1/2MS培养基中萌发，获得山豆根无菌苗；(2)用R1601发根农杆菌诱导山豆根无菌子叶发根；(3)将步骤(2)所得到的毛状根分株置于培养液中进行快速繁殖培养，繁殖倍数达到39-55倍，通过本发明所获得的山豆根毛状根具有生长速度快、遗传稳定性好、合成能力强且稳定、向培养基中释放部分代谢产物的特点，能够用于大规模生产生产工业用山豆根的替代资源。

主权项

一种山豆根毛状根的快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)无菌苗的获得：取山豆根种子置于0.1v/v％升汞消毒10min，再用无菌水冲洗3次，并用消毒滤纸除去表面水分后接种到不添加任何激素的1/2MS培养基中，放置在培养室内进行萌发，获得山豆根无菌苗子叶，其中MS培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(2)R1601发根农杆菌诱导山豆根无菌子叶发根：将山豆根的无菌苗子叶放入R1601菌液中浸泡16min取出，以无菌水为对照，然后用无菌滤纸吸取外植体表面多余的菌液，转移至添加乙酰丁香酮100μmol/L的1/2MS固体培养基上培养3d获得毛状根，处理30瓶，每瓶1个无菌子叶，当诱导出的根长至约2cm时，在无菌条件下将其剪下，于添加头孢噻肟钠300m/L的1/2MS固体平板培养基上进行除菌培养，每5d转接1次，直至无菌，获得无菌毛状根；(3)山豆根毛状根繁殖：将步骤(2)所得到的毛状根分株置于1/2MS繁殖培养液中进行快速繁殖，培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的，其中1/2MS繁殖培养液中添加0.1‑1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1‑1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1‑1.0mg/L的苄基腺嘌呤6‑BA和30g/L蔗糖，培养基的pH值为5.8。