一种利用三孢布拉霉菌制备β-胡萝卜素的发酵方法

摘要

本发明公开了一种利用三孢布拉霉菌制备β-胡萝卜素的发酵方法，其包括如下步骤：(1)菌种活化；(2)一级种子培养；(3)二级种子培养；(4)发酵培养。本发明对设备要求不高、成本投入较小，且原料来源广泛，成本低，β-胡萝卜素的产量较改进前工艺明显提高，因此，可实现规模化生产。

主权项

一种利用三孢布拉霉菌制备β‑胡萝卜素的发酵方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)菌种活化；(2)一级种子培养；(3)二级种子培养；(4)发酵培养；其中，(1)菌种活化：在无菌条件下，将三孢布拉霉正、负菌株分别接种到斜面PDA培养基上，置于培养箱内，26～30℃培养4～5d，待三孢布拉霉正、负菌株分别长出孢子后，在无菌条件下，用无菌生理盐水将斜面培养基中孢子刮洗下来，配制成均匀的孢子悬液，使正、负菌孢子悬液的浓度分别为：正菌10⁴个孢子/mL，负菌10⁵个孢子/mL；(2)一级种子培养：将正、负菌株以孢子悬液的方式分别接入种子罐，正菌株的培养温度为28℃，转速为400～600r/min，通气量为0.6～0.8vvm，罐压为0.03～0.06MPa，培养时间为20～36h；负菌株的培养温度为28℃，转速为500～700r/min，通气量为0.6～0.8vvm，罐压为0.03～0.06MPa，培养时间为20～36h，得到三孢布拉霉正、负菌株一级种子液；(3)二级种子培养：将所述步骤(2)培养得到的所述三孢布拉霉正、负菌株一级种子液混合接种到二级种子罐中，所述三孢布拉霉正菌株一级种子液与所述三孢布拉霉负菌株一级种子液的接种体积比为1:5～1:10，接种量为10～15％，培养时间为10～20h，培养条件为：28℃，转速为600～900r/min，通气量为0.6～0.8vvm，罐压为0.03～0.06MPa，得到二级种子液；(4)发酵培养：采用压差法将所述二级种子液接入发酵罐中，接种量为10～15％，在pH 5.5～7.0的条件下培养96～120h，培养条件为：28℃，转速和通气量随菌体的生长情况进行控制；发酵过程需要补入植物油，根据取样检测结果补入淀粉水解液，根据菌体的生长情况进行补稀料；其中，发酵培养基组成为：所述淀粉水解液、大豆蛋白粉、鱼粉、植物油、硫酸铜、硫酸镁、磷酸二氢钾、V_E、乳化剂。