一种生物表面活性剂功能化修饰耐辐射奇球菌DR的方法及其应用

摘要

本发明涉及一种生物表面活性剂功能化修饰耐辐射奇球菌DR的方法。首先将稻谷秸秆和谷壳埋入农田土壤中堆肥，经富集培养、发酵培养和平板化学培养初筛，得到一种生物表面活性剂菌株液体，将其对耐辐射奇球菌DR进行功能化修饰，得到一种生物表面活性剂功能化修饰耐辐射奇球菌DR吸附剂，并将其应用于铀污染水体修复中。本发明方法所使用自然资源生物质为原料，对环境无毒无污染，实现了自然资源的再生利用和资源化。同时，方法简单、反应条件温和，所得吸附剂，能使浓度为0.45~0.50mg/L铀污染水体中铀的含量下降95.2~95.78%，具有很好的社会效益和经济效益。

主权项

一种生物表面活性剂功能化修饰耐辐射奇球菌DR的方法，其特征在于，首先将稻谷秸秆和谷壳埋入农田土壤中堆肥，在低温条件下经过富集培养、发酵培养和平板化学培养初筛，得到一种生物表面活性剂菌株液体，将其对耐辐射奇球菌DR进行功能化修饰，得到一种生物表面活性剂功能化修饰耐辐射奇球菌DR吸附剂，具体步骤如下：（1）耐辐射奇球菌DR菌体的制备将真空冷冻保存在实验室的耐辐射奇球菌DR划线接种在预先配制好的固体TGY培养基上，使用接种环挑取单株耐辐射奇球菌DR接种于三角瓶中摇瓶培养至对数生长早期，然后按一定比例的接种量接种转至大瓶培养基中，在一定温度下继续培养一段时间，待耐辐射奇球菌DR细胞培养稳定后，离心收集耐辐射奇球菌DR菌体，经7000 r/min离心10 min 后，收集得到新鲜的耐辐射奇球菌DR菌体，然后使用pH值为7的磷酸缓冲溶液将菌体重新悬浮，充分振荡后，再次离心收集耐辐射奇球菌DR菌体，经8000 r/min离心15 min 后，将收集的耐辐射奇球菌DR菌体置于真空冷冻箱中‑20 ℃冷冻12 h，在‑80 ℃继续冷冻12 h，最后将冷冻的耐辐射奇球菌DR菌体置于真空冷冻干燥机中干燥，得到干燥的耐辐射奇球菌DR菌体；（2）生物表面活性剂菌株液体的制备取10 g处理后的堆肥样品，置于装有90 mL无菌水的250 mL三角瓶中振荡25 min后，静置30 min，得到土壤悬液，吸取2 mL土壤悬浮液接种到富集培养基中，放入温度为25 ℃、转速为220 r/min的恒温培养箱中进行振荡培养5 d，吸取上述1 mL富集培养液接种于发酵培养基中，放入温度为30 ℃、转速为220 r/min的恒温培养箱中进行振荡培养，直到观测到乳化现象，取1 mL稀释至10^‑3之后，以该稀释发酵液1 mL涂布于平板培养基上，于37 ℃恒温静置培养3 d，挑选平板长势良好的菌落进行划线分离，按照上述方法进行再次发酵培养、驯化2次，即得到驯化后的菌株，将驯化后的菌株在富集培养液中继续培养1 d后，吸取1 mL菌液按4.5%的接种量接种于发酵培养基中，调节pH值为6.5，在温度为25 ℃、转速为200 r/min的恒温培养箱中，继续进行振荡培养2 d后，即得到生物表面活性剂菌株液体；（3）生物表面活性剂功能化修饰耐辐射奇球菌DR称取一定质量干燥的耐辐射奇球菌DR菌体置于300 mL带塞三角瓶中，加入一定体积生物表面活性剂菌株液体，再加入50 mL去离子水，超声分散30 min，将三角瓶放在恒温水浴箱中磁力搅拌，待混合液混合均匀后，经8000 r/min离心15 min 后，再分别用无水乙醇和去离子水洗涤3 次，置于真空冷冻干燥机中干燥，得到一种生物表面活性剂功能化修饰耐辐射奇球菌DR吸附剂。