抗鸡传染性喉气管炎病毒特异性转移因子的制备方法

摘要

本发明涉及一种抗鸡传染性喉气管炎病毒特异性转移因子的制备方法。本发明以鸡脾脏或外周血为原料，制成淋巴细胞单层，然后用植物血凝素和鸡传染性喉气管炎病毒诱导培养淋巴细胞，体外生产抗鸡传染性喉气管炎病毒特异性转移因子。本发明所制备的特异性转移因子可以用于预防和治疗鸡传染性喉气管炎病，同时可以提高鸡的免疫力。本发明具有特异性强、成本低、产出率高、效果好等优点，是一种较为理想的鸡传染性喉气管炎病毒转移因子制备方法。

主权项

一种抗鸡传染性喉气管炎病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于，该制备方法的步骤如下：(1)无菌环境下采取鸡脾脏或鸡血，用鸡脾脏或外周血制备淋巴细胞单层。无菌静脉采取动物全血20‑30ml，加0.8％肝素溶液0.3m1抗凝，静置30‑60min，用带胶球吸管吸取红细胞层以上的所有血浆，特别是紧接红细胞层上的白细胞层要尽量吸取，分装于消毒离心管内，用PBS(pH为7.2)液反复洗涤2‑3次，离心速度800‑1200转/分，然后用含30％犊牛血清水解乳蛋白40ml进行白细胞培养，混合均匀后分装于容量100ml细胞培养瓶中，塞紧瓶塞，置37℃细胞培养箱中，经2‑3天，白细胞均匀贴壁，即制成淋巴细胞单层。(2)将步骤(1)制备的淋巴细胞单层进行传代培养。显微镜下观察步骤(1)制备的淋巴细胞单层，确认其生长状态良好即可进行细胞的传代培养。(3)抗鸡传染性喉气管炎病毒特异性转移因子的制备：当步骤(2)传代的淋巴细胞长成单层后，用植物血凝素(终浓度为100mg/L)和鸡传染性喉气管炎病毒(终浓度为1000‑1500血凝单位/ml)诱导培养，离心培养2‑3天后，8000转/分、20‑30min离心细胞培养液，取上清液，将其置于4℃下磁力搅拌透析18‑24h，超滤除菌，即获得体外制备抗鸡传染性喉气管炎病毒特异性转移因子。