食管癌顺铂耐药性细胞株及其构建方法和应用

摘要

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及食管癌顺铂耐药性细胞株及其构建方法和应用。本发明以食管癌细胞为诱导对象，采用从0.02-0.04μg/ml、0.05-0.07μg/ml、0.12-0.13μg/ml、0.2-0.3μg/ml和0.4-0.6μg/ml 5个浓度梯度连续处理处于对数生长期的食管癌细胞，培养5-7个月，得在作用浓度为0.4-0.6μg/ml顺铂的培养体系中稳定生长、传代的细胞株。本发明构建得到的食管癌顺铂耐药细胞株的耐药倍数在11倍以上，为研究食管癌耐药机制、寻找克服食管癌耐药的有效治疗方法及指导临床用药提供了耐药细胞模型，具有良好的应用前景。

主权项

食管癌顺铂耐药性细胞株，其特征在于，通过以下步骤构建得到：S1将食管癌细胞株放置在36‑38℃、4‑6%CO₂、湿度为95‑98%条件下的培养箱中培养；S2将对数生长期的食管癌细胞培养至70‑80%贴壁率时，弃去上清，加入含顺铂的培养液，所述顺铂的作用浓度为0.02‑0.04μg/ml，培养1‑2小时后弃去含药培养液，加入1‑2 ml胰蛋白酶‑EDTA消化液，接着以l×10⁵/ml细胞浓度接种于新培养瓶中，在36‑38℃、4‑6%CO₂、湿度为95‑98%的条件下培养，待细胞长至70‑80%贴壁率时再次加入顺铂处理，24小时后换新鲜的培养液，维持顺铂的作用浓度不变，培养6‑8周后，得稳定生长、传代的细胞株；S3在步骤S2得到的食管癌细胞中依次增加顺铂的作用浓度，重复步骤S2的操作，每增加一次顺铂的作用浓度培养4‑5周，培养5‑7个月，得在作用浓度为0.4‑0.6μg/ml顺铂的培养体系中稳定生长、传代的细胞株，即得。