一种固定化茶叶过氧化氢酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种固定化茶叶过氧化氢酶的制备方法，属于生物活性物质的分离提取技术领域。本发明通过从茶叶中提取过氧化氢酶，用甘三脂对其进行包覆固定化，从而得到固定化茶叶过氧化氢酶的制备方法。本发明不仅在制备过程中避免了无机盐的使用，是环境友好型生产工艺，而且制得的过氧化氢酶酶活至少达到11000U/mg以上，产品回收率达到25％以上，均高于现有的从动物肝脏中提取过氧化氢酶的方法，适合工业化生产的要求，可用于食品加工，具有很好的缓释效果。

主权项

一种固定化茶叶过氧化氢酶的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取100～200g新鲜茶叶用去离子水冲洗干净，沥干水分后用剪刀将其剪碎成1～3cm的碎片，放入2L玻璃瓶中，加入500～700mL pH为6～7的磷酸缓冲液和15～20g 聚乙烯吡咯烷酮，放入高速匀浆机中，以20000～25000r/min的转速高速匀浆1～3min；（2）匀浆结束后，将浆液移入烧杯中，放置在冰水浴中，在4～6℃下静置1～2h，并用注射器吸取150～200mL上层液体放入卧式离心机，以12000～15000r/min的转速离心5～15min，分离得到上清液，于4～6℃下保存；（3）将上述得到上清液过凝胶柱进行过滤层析，用pH为7～8的磷酸缓冲液进行洗脱，洗脱流速为1～3L/h，收集层析洗脱液得到纯化后的过氧化氢酶母液；（4）量取200～300mL乙酸乙酯装入500mL三口烧瓶中，加入50～60g三棕榈酸甘三酯和7～8g聚乳酸以及2～3g羟基乙酸，放入漩涡振荡器中，以10～20W的功率，300～500rpm/min的速率振荡乳化20～30min制得预乳液；（5）将预乳液再移入超声乳化机中，加入10～20g卵磷脂，将50～70mL上述过氧化氢酶母液逐滴滴入混合乳液中，控制滴加速度使其20～30min内滴加完毕，以200～300W的功率超声乳化10～20min，制得双乳液；（6）将上述制得的双乳液放入旋转蒸发器中，升温至80～90℃，旋蒸去除乙酸乙酯后得浓缩液，将其放入冷冻离心机中，在4～5℃下离心30～50min，离心转速为14000～16000r/min，分离得到固定化过氧化氢酶脂质体，用冷冻干燥机干燥后即得一种固定化茶叶过氧化氢酶。