利用时间分辨上转换发光检测技术进行磁性结合测定的方法

摘要

本发明公开了一种用于检测分析物在样品中是否存在及其含量的一般磁性结合测定方法。该方法采用磁性效应原理来分离和浓缩复杂样品中的分析物，且无需使用诸如带通滤光片的昂贵光学元件，就能通过时间分辨上转换荧光检测技术来进行高灵敏度的检测。该方法采用脉冲的长波长光来进行激发和时间延迟的发光检测，且几乎不受样品介质干扰。此外，使用长波长激发光大大简化样品制备和纯化清理过程诸如去除会显著干扰荧光探针的激发效率以及红细胞的清理操作。

主权项

一种用于检测分析物在样品中是否存在及其含量的测定方法，其特征在于所述测定方法包括以下步骤：(1)使含有分析物的样品与磁珠结合物、探针结合物接触，其中所述磁珠结合物为磁珠与第一特异性结合部连接形成，所述探针结合物为用来作为标记的检测探针与第二特异性结合部连接而成，所述检测探针在短于激发光波长的波长处发出发光寿命超过5μs的发光，所述第一特异性结合部和所述第二特异性结合部分别与所述分析物的不同表位特异性结合，形成夹心复合物；所述检测探针为封装有上转换发光分子的胶乳颗粒，胶乳颗粒通常由以下材料制成：苯乙烯‑马来酸酐共聚物、聚乙酸乙烯酯、聚乙烯基吡啶、聚二乙烯基苯、聚对苯二甲酸丁二醇酯、丙烯腈、氯乙烯‑丙烯酸酯，或其醛基、羧基、氨基、羟基或酰肼衍生物；所述上转换发光分子为镧系元素螯合物的分子；(2)使用磁性装置将样品中磁性结合体与所述样品的其余部分分离，其中所述磁性结合体包括所述夹心复合物；(3)使用在第一波长处的脉冲光源来激发分离的磁性结合体，从而在每次脉冲之后的一定延迟后，通过收集和测量在第二波长处的发光来获得检测信号，其中所述第二波长短于所述第一波长；(4)将所述检测信号与校准曲线作比较，从而获得所述样品中所述分析物的数量，其中所述样品中所述分析物的数量与所述检测信号成正比。