一种冷激表达型T载体及其应用方法

摘要

一种冷激表达型T载体及其应用方法。动植物和常温微生物的基因所编码的蛋白质不很稳定，多数蛋白在异源表达后的数小时内变性；蛋白对重组细胞的生长具有抑制或毒害作用，因而难以得到重组表达。本发明设计并构建的新型T载体具有以下特征：（1）在低温环境下表达外源基因，能够有效防止蛋白变性或降低细胞毒性；（2）质粒分子小，具有基因容量大、转化率高等特点，能够提高基因克隆效率；（3）质粒拷贝数高，进一步提高表达水平；（4）构建为T载体，结合TA克隆技术和低温表达功能，适用于文库构建和活性筛选。用本发明的载体对易变性或细胞毒性蛋白的编码基因进行PCR克隆、基因文库的构建和筛选，以及基因的超量表达，可以简化操作步骤、节约材料和时间、提高试验的准确性和成功率。

主权项

一种低温表达型T载体，其基本特征是兼具以下三方面优势：（1）一种分子小、拷贝数高的大肠杆菌高效表达载体；（2）目标基因在冷激启动子的调控下进行低温表达；（3）线性载体的末端带有3’突出的T碱基，能够与带有3’突出的A碱基的目标基因片段进行TA互补和连接。