发明名称 |
一种用于MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒及检测方法 |
摘要 |
本发明涉及分子生物学领域,具体涉及一种用于MMP2基因分型的ARMS-qPCR检测试剂盒,本发明还涉及一种基于本试剂盒的MMP2基因分型ARMS-qPCR检测方法。其中,本试剂盒包括qPCR反应体系,所述qPCR反应体系包括qPCR混合反应液、参照引物、ARMS引物和阳极对照样品;所述qPCR混合反应液包括PCR缓冲液、dNTP、MgCl<sub>2</sub>、Tag酶、PCR下游引物和TaqMan探针;所述qPCR反应体系中,各组分的终浓度分别为:PCR缓冲液为1X;dNTP为0.1~1.5mM;MgCl<sub>2</sub>为0.5~5mM;Tag酶为0.05~0.1U/μl;PCR下游引物为0.1~1μM;TaqMan探针为0.1~1μM;参照引物为0.5μM;ARMS引物为0.5μM;阳性对照样品为1~10ng/μl。与直接测序等基因分型的技术相比,本发明用于MMP2基因分型有特异性强、灵敏度高,操作简单快速、高通量、判读结果可靠,简便等优势。 |
申请公布号 |
CN105506068A |
申请公布日期 |
2016.04.20 |
申请号 |
CN201410587531.5 |
申请日期 |
2014.10.20 |
申请人 |
江苏所罗门兄弟医学科技有限公司 |
发明人 |
张道允;巩子英;张恒;罗坚诚;贾宁 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种用于MMP2基因分型的ARMS‑qPCR检测试剂盒,其特征在于:包括qPCR反应体系,所述qPCR反应体系包括qPCR混合反应液、参照引物、ARMS引物和阳极对照样品;所述qPCR混合反应液包括PCR缓冲液、dNTP、MgCl<sub>2</sub>、Tag酶、PCR下游引物和TaqMan探针;所述qPCR反应体系中,各组分的终浓度分别为:PCR缓冲液为1X;dNTP为0.1~1.5mM;MgCl<sub>2</sub>为0.5~5mM;Tag酶为0.05~0.1U/μl;PCR下游引物为0.1~1μM;TaqMan探针为0.1~1μM;参照引物为0.5μM;ARMS引物为0.5μM;阳性对照样品为1~10ng/μl。所述PCR下游引物的序列如MMP2‑R所示;所述TaqMan探针的序列如MMP2‑TaqMan所示;所述参照引物的序列如MMP2‑C所示,能够扩增所有不同MMP2基因型;所述ARMS引物为两种上游引物中的任意一种,分别对应MMP2CCrs1132896、TTrs1132896型基因型,这两种上游引物的序列如MMP2‑F1、MMP2‑F2所示;这两种ARMS引物分别在3’末端与不同的基因型碱基匹配,同时在其3’末端倒数第2、3位增加一个或者两个碱基错配,用于特异性扩增的MMP2rs1132896位基因型为CC/TT/TC;所述阳极对照样品分别为MMP2不同基因型碱基置换的质粒基因组DNA。 |
地址 |
224000 江苏省盐城市经济技术开发区希望大道南路5号国际软件园4号楼13层 |