一种利用扩增DNA片段长度多态性测定短链RNA的方法

摘要

本发明公开了一种利用扩增DNA片段长度多态性测定短链RNA的方法，属于分子生物技术领域，包括以下步骤：首先利用至少两种与待测短链RNA相比无天然同源序列的合成小RNA作为测定的内标，将这些合成小RNA以不同分子数混合，形成动态小RNA标准分子梯度；再以等量的所述动态小RNA标准与所述待测短链RNA混合，经由RNA反转录、cDNA加尾、PCR同步扩增及PCR产物DNA长度多态性片段的荧光定量分析，测得所述待测短链RNA扩增产生的DNA片段荧光强度在所述动态小RNA标准荧光强度梯度上的相对比例，本方法可以实现对短链RNA尤其是miRNA的绝对定量，且具有高特异性、高灵敏度、结果客观、重复性好，可在100-10⁶拷贝数范围内准确定量，也适用于RNA粗提物。

主权项

一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：首先利用至少三种与待测短链RNA相比无天然同源序列的合成小RNA作为测定的内标，将这些作为内标的所述合成小RNA以不同分子数混合，形成动态小RNA标准分子梯度；再以等量的所述动态小RNA标准与所述待测短链RNA混合，经由RNA反转录、cDNA加尾、PCR同步扩增及PCR产物DNA长度多态性片段的荧光定量分析,测得所述待测短链RNA扩增产生的DNA片段荧光强度在所述动态小RNA标准荧光强度梯度上的相对比例，所述待测短链RNA分子数目与荧光强度的对应关系符合一元二次方程式的回归拟合，由于所述动态小RNA标准的用量一致，不同样本中同种短链RNA所测得的荧光强度在标准荧光强度梯度上的相对值反映其分子拷贝数之相对比例；从而实现所述待测短链RNA的相对定量；所述RNA反转录过程中，所采用的引物为PCT/CN2013/070525中所述的欧米茄引物。