一种桑树子叶不定芽的诱导方法

摘要

本发明公开了一种桑树子叶不定芽的诱导方法，属于植物基因工程领域。具体是以桑树种子内胚中子叶为外植体，流水冲洗浸泡的种子经表面杀菌后分离得到子叶，接在诱导培养基中直接诱导产生不定芽，不定芽长至1cm移至生根培养基中，形成完整植株。采用本发明方法经不定芽产生的再生植株时间周期短，结果稳定，重复性好，主要用于桑树转基因，是桑树转基因育种的前提和基础。

主权项

一种桑树子叶不定芽的诱导方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将桑树种子清水浸泡12h后，用流水冲洗1‑2h，再用7%次氯酸钠溶液或0.1%氯化汞溶液灭菌15分钟，然后用灭菌蒸馏水冲洗3‑4次；（2）在解剖镜下无菌环境中剥去种皮，分离子叶；（3）将分离得到子叶接入不定芽诱导培养基1上，置于光照培养箱内26℃，光周期16L/8D诱导培养，培养3周后转入不定芽诱导培养基2中；所述不定芽诱导培养基1为：MS培养基+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+K8P +10%椰子汁+3mg/L6‑苄氨基腺嘌呤（6‑BA）+0.1mg/L萘乙酸（NAA），pH值为5.8‑6.0；所述不定芽诱导培养基2为：MS培养基+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+K8P +10%椰子汁+2mg/L6‑苄氨基腺嘌呤（6‑BA）+0.1mg/L萘乙酸（NAA），pH值为5.8‑6.0；（4）当不定芽形成3‑4片叶片时移入桑树组织培养继代培养基中；所述继代培养基为：MS培养基+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+B族维生素+0.5mg/L6‑苄氨基腺嘌呤（6‑BA）+0.1mg/L萘乙酸（NAA），pH值为5.8‑6.0；（5）当不定芽长至1厘米时，移入生根培养基形成完整植株；所述生根培养基为：1/2MS培养基+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+B族维生素+0.1mg/L吲哚丁酸（IBA），pH值为5.8‑6.0。