一种固定线虫单条虫DNA粗提液及其制备方法与应用

摘要

本发明属于分子生物学检测鉴定技术领域，具体涉及一种固定线虫单条虫DNA粗提液及其制备方法与应用。本发明通过线虫样品的洗涤、固定线虫样品的裂解以及DNA粗提液的制备等步骤，制备得到固定线虫单条虫DNA粗提液，该提取液进一步进行PCR扩增并检测，条带清晰，结果可靠，准确性、灵敏度和特异性高，操作简单，成本低，可用于线虫的分子鉴定。对于其他已固定植物寄生线虫的分子鉴定具有重要的理论依据和指导意义。

主权项

一种固定线虫单条虫DNA粗提液的制备方法，其特征在于包含如下步骤：(1)线虫样品的洗涤：将固定线虫置于水中初步清洗，然后将线虫转至1×TE缓冲液或1×PBS缓冲液中，浸泡洗涤12h～24h；(2)固定线虫样品的裂解：将步骤(1)洗涤后的单条固定线虫置于6μL～10μL裂解液中，并将线虫刺破，得到固定线虫和裂解液的混合物；然后将混合物迅速冻结；(3)DNA粗提液的制备：将步骤(2)中冻结后的固定线虫和裂解液的混合物在95℃～99℃的条件下处理5min～10min；然后加入蛋白酶K除蛋白，得到固定线虫单条虫DNA粗提液。