慢病毒表达载体及其制备方法和应用、重组慢病毒的制备方法

摘要

本发明公开了一种及其制备方法和应用、重组慢病毒的制备方法，所述慢病毒表达载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual.WPRE载体，pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual.WPRE载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV/GFP.WPRE载体的GFP序列被替换为双基因表达盒子Dual得到；双基因表达盒子Dual包括从5’到3’端依次排列的如下结构：第一多克隆位点-弗林蛋白酶切割位点-V5标签-Spacer-2A肽-第二多克隆位点，其中，“-”代表连接。这种慢病毒表达载体利用2A肽实现双外源基因在哺乳动物细胞内的表达，2A肽具有“自我剪切”的特性，在蛋白质的翻译过程中，2A肽改变了核糖体的活性，促进2A肽残基Gly与tRNA^Gly之间酯链的水解，从转录复合物上释放上游多肽的同时又起始下游多肽的翻译，在翻译水平上实现的双基因表达。

主权项

一种慢病毒表达载体，其特征在于，所述慢病毒表达载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV‑Dual.WPRE载体，所述pRRLSIN.cPPT.MSCV‑Dual.WPRE载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV/GFP.WPRE载体的GFP序列被替换为双基因表达盒子Dual得到；所述双基因表达盒子Dual包括从5’到3’端依次排列的如下结构：第一多克隆位点‑弗林蛋白酶切割位点‑V5标签‑Spacer‑2A肽‑第二多克隆位点，其中，“‑”代表连接。