一种测定烟草中常用杀菌剂残留量的方法

摘要

本发明公开一种测定烟草中常用杀菌剂残留量的方法，所述常用杀菌剂为霜霉威、多菌灵、恶霜灵、甲霜灵、稻瘟灵和甲基硫菌灵，包括以下步骤：提取烟草中的目标物、N-丙基乙二胺纯化、标准储备液和标准工作液的配制、超高效液相色谱-串联质谱测定。本发明针对烟草中常施用的6种杀菌剂，利用超高效液相色谱-串联质谱仪，同位素内标定量法，建立UPLC–MS/MS同时快速分析烟草中6种杀菌剂残留的方法，与标准方法相比，合并了两个标准方法的检测指标，并加入了霜霉威，提高了方法的灵敏度，缩短了分析时间和检测成本。

主权项

一种测定烟草中常用杀菌剂残留量的方法，所述常用杀菌剂为霜霉威、多菌灵、恶霜灵、甲霜灵、稻瘟灵和甲基硫菌灵，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取烟草中的目标物：称取烘干磨好的烟叶样品于离心管中，加入超纯水浸润，依次加入氘代内标和乙腈，涡漩混合振荡；放入冰箱冷冻后取出，依次加入无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，涡旋振荡后离心；(2)N‑丙基乙二胺纯化：移取上清液于新的离心管中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，于漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用超纯水稀释后待测；(3)标准储备液和标准工作液的配制：用乙腈配制霜霉威、多菌灵、恶霜灵、甲霜灵、稻瘟灵和甲基硫菌灵标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，‑20℃保存；取一定量的各化合物储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得5μg/mL混合标准储备液；用乙腈准确配制多菌灵‑d₄和甲基硫菌灵‑d₆氘带内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，‑20℃保存；取一定量的各内标储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得10μg/mL混合内标标准储备液；所有的储备液于‑20℃保持，使用前将其恢复到室温；用空白烟叶的萃取基质配制不同浓度的霜霉威、多菌灵、恶霜灵、甲霜灵、稻瘟灵和甲基硫菌灵标准工作溶液；(4)超高效液相色谱‑串联质谱测定：吸取空白烟叶溶液和配制好的不同浓度的霜霉威、多菌灵、恶霜灵、甲霜灵、稻瘟灵和甲基硫菌灵标准工作溶液，注入串联质谱检测器，按内标法以峰面积计算出样品待测液中霜霉威、多菌灵、恶霜灵、甲霜灵、稻瘟灵和甲基硫菌灵含量；选取90％流动相A和10％流动相B为初始流动相体系，分析时间为12min，进样量为10μL；所述流动相A是体积分数为0.1％的甲酸水，流动相B是体积分数为0.1％的甲酸甲醇；前述串联质谱检测器采用UPLC‑MS/MS系统，选取的色谱柱为UPLC色谱柱：UPLCHSST3，规格为100mm×2.1mm、1.8μm，柱温35℃，进样量10μL；串联质谱检测的条件为：电喷雾离子源，喷雾电压(IS)：2.6kV；离子化温度350℃；雾化气流量：1000L/Hr；锥孔气流量50L/Hr；碰撞气流量为0.15ml/min；碰撞气为氩气，其余气体为氮气；驻留时间为30msec，正离子MRM模式采集；色谱柱采用梯度洗脱，条件为：0～2min，90％A～50％A；2～2.4min，50％A～30％A；2.4～4.0min，30％A～20％A；4.0～6.0min，20％A～5％A，6.0～9.8min，5％A～5％A；9.8～10.0min，5％A～90％A，10.0～12.0min，90％A～90％A；流动相流速为0.3mL/min。