一种快速高效吸附汞离子的载体及其细菌表面展示工程菌和应用

摘要

本发明涉及分子生物学以及基因工程领域，具体的说是一种快速高效吸附汞离子的基因工程菌的构建及其应用。该基因工程菌（命名为Top10/pBATGst）通过一个自转运蛋白的分泌信号，将来自奇异变形杆菌的谷胱甘肽转移酶（GST）大量展示在大肠杆菌（Top10）表面。Top10/pBATGst可以迅速、高效地吸附水环境中的汞离子。本发明中的基因工程菌对海水和淡水环境中汞离子的吸附均可达到95%以上，而且操作简单，吸附在基因工程菌上的汞离子通过调节pH即可回收汞离子。因此，基因工程菌Top10/pBATGst可望在环境中汞离子的清除、回收和再利用中发挥重要作用。

主权项

一种快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的应用，其特征在于：所述工程菌可用于吸附环境中的汞离子，所述工程菌吸附的汞离子，经pH的调节后可将汞离子解吸附后回收再利用；所述细菌表面展示工程菌的构建方法为采用细菌表面展示的方式，通过信号传递系统，含有自转运蛋白的分泌序列的载体pBAT将谷胱甘肽转移酶GST锚定在宿主菌表面，即得到吸附汞离子的细菌表面展示工程菌；具体为：1)质粒载体pBATGst的构建：a.将质粒pBAT用限制性内切酶ScaI处理，用去磷酸化酶去掉酶切位点暴露的磷酸基团；b.采用奇异变形杆菌作为模板，以引物GSF3和GSR3进行PCR扩增，扩增产物纯化，而后与ScaI处理过的pBAT载体在室温条件下连接2小时，即得到质粒载体pBATGst；2)Top10/pBATGst工程菌的构建将上述所得连接处理混合液质粒载体pBATGst转化大肠杆菌Top10，并在含有100μg/ml氨苄青霉素(ampici l l in，Ap)的LB固体培养基上培养筛选含有目的插入片段的重组转化子，即为Top10/pBATGst；所述引物GSF3为:5’‑ATGATCGATCTTTATTATGCAAACAC‑3’，和GSR3为:5’‑ACCAAACAGTTTTTTGGCTGC‑3’。