纯化水溶性纳米氧化铁鼠源性IgG类单抗偶联物的方法

摘要

本发明公开了适合规模化高效纯化水溶性氧化铁纳米粒子与IgG类单克隆抗体偶联物的方法，属生物技术领域。针对目前氧化铁纳米粒子抗体偶联物纯化工艺复杂，回收率低，难以规模化生产，本发明通过采用单端氨基化聚乙二醇封闭氧化铁纳米粒子与抗体偶联物的残留羧基，降低偶联产物的表面ζ电位，调整溶液pH值至4.5～5.0，进一步降低偶联产物在溶液中的净电荷含量、实现普通高速离心法规模化高效纯化氧化铁纳米粒子与抗体偶联物。本发明简化了氧化铁纳米粒子与抗体偶联物的实验操作流程，降低了对分离设备的要求，适合大批量纯化氧化铁纳米粒子IgG类单克隆抗体偶联物，得率在90%以上，且偶联产物的光特性以及生物活性未见明显变化。

主权项

一种纯化水溶性纳米氧化铁鼠源性IgG类单抗偶联物的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将水溶性羧基修饰的氧化铁纳米粒子活化，加入IgG类单克隆抗体溶液，调整溶液pH至7.0～9.0后，偶联反应；（2）偶联反应结束后，溶液中加入单端氨基化聚乙二醇封闭偶联产物中氧化铁纳米粒子表面残留的羧基，将反应溶液pH值调整至弱酸性；（3）用磁场强度为100 T/m SuperMag^TM分离器或高速离心，弃上清液，取沉淀；所述步骤（1）中活化为将水溶性羧基修饰的氧化铁纳米粒子溶解于pH 5.0～6.0，0.05 mol/L硼酸盐缓冲液中，分别加入1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺以及N‑羟基硫代琥珀酰亚胺，37℃反应2小时，活化水溶性氧化铁纳米粒子羧基；步骤（2）中将反应溶液pH值调整至弱酸性为将pH值调整至4.5～5.0。