牛胰蛋白酶的生产工艺

摘要

本发明提供一种牛胰蛋白酶的生产工艺，利用基因重组技术，通过在大肠杆菌中表达出牛胰蛋白酶原或牛胰蛋白酶原融合蛋白的包涵体蛋白，然后进行酸化处理将包涵体蛋白变、复性为折叠好的牛胰蛋白酶原或牛胰蛋白酶原融合蛋白，采用原核表达系统表达量高，变性、复性及后续纯化步骤简单易行，工艺成本低。制备的有活性的牛胰蛋白酶可用于重组人胰岛素及胰岛素类似物的生产。

主权项

牛胰蛋白酶的生产工艺，其特征在于，利用基因重组技术在大肠杆菌中表达出牛胰蛋白酶原或牛胰蛋白酶原融合蛋白的包涵体蛋白，通过对包涵体蛋白胞外变性、酸化处理、复性、纯化操作，获得可激活的牛胰蛋白酶原或牛胰蛋白酶原融合蛋白，再通过自激活、肠激酶或胰蛋白酶处理上述牛胰蛋白酶原或牛胰蛋白酶原融合蛋白，得到有活性的牛胰蛋白酶；其中，所述胞外变性、酸化处理是指将包涵体蛋白溶解于pH值8‑9.5的变性液中3‑5小时，然后用酸调变性液的pH为2‑5，然后离心取上清液；复性是指向上清液中加入含有环糊精或其衍生物的复性液，于低温条件下复性。