一种转基因材料来源食用油的分子检测方法

摘要

本发明属于生物检测技术领域，具体为一种转基因材料来源食用油的分子检测方法。针对食用油脂中核酸含量低、破坏严重、DNA序列片段短的特点，本发明利用DNA提取试剂盒法加核酸富集处理步骤，有效地从食用油中提取到可用于PCR扩增反应的DNA模板，设计并筛选了几个能有效扩增DNA模板的引物，通过普通PCR技术定性检测出了大豆及玉米的内源基因tRNA,18S rRNA，以及外源调控序列CaMV 35S，为食用油原料是否转基因的检验提供了一种基于PCR的稳定有效的方法。本发明的方法对于经过高温处理（烹饪）以后的食用油。

主权项

一种转基因材料来源食用油的分子检测方法，其特征在于具体步骤为：（1）用CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒提取食用油中的DNA；将食用油中的核酸富集到CTAB裂解液中，通过试剂盒操作纯化裂解液中的DNA，并将DNA储存在洗脱缓冲液EB中，存放在2‑8℃；提取的具体操作步骤为：对于某种食用油，取两支50ml的试管，每管加入2ml试剂盒中的裂解液PL以及40ml食用油；颠倒混匀，45℃，250r/min震荡1h，10000r/min离心5min，去油相，在水相中再加入食用油40ml：再重复上述操作3次，最后一次去油相后不加入食用油；将两支试管中第4次离心后保留的水相按每管600μl分装到2ml EP管中，每管加入600μl 24:1的氯仿/异戊醇，颠倒充分混匀几分钟，13000rpm离心5min，然后按试剂盒后续操作说明进行；（2）设计并筛选得到扩增tRNA基因的一个引物以及扩增18S基因的三个不同扩增长度的引物，分别为：tRNA：SEQ.ID.NO1SEQ.ID.NO218S‑1：SEQ.ID.NO3SEQ.ID.NO418S‑2：SEQ.ID.NO5SEQ.ID.NO618S‑3：SEQ.ID.NO7SEQ.ID.NO8（3）设计35S启动子引物：35S：SEQ.ID.NO9SEQ.ID.NO10（4）DNA提取出来以后，所有实验均设阳性对照和空白对照；（5）用步骤（2）和步骤（3）中的引物PCR扩增步骤（1）从食用油中提取到的模板DNA；（6）将PCR扩增产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳分离，EB染色后鉴定是否存在扩增产物，并依此判断该食用油的原料是否为转基因或含转基因成分：若存在18S的扩增产物，则确定提取出了食用油中的DNA；若同时存在内源基因18S和外源基因35S的产物，则该食用油的原料为转基因或含转基因成分；若存在内源基因18S而不存在外源基因35S产物，则该食用油的原料为非转基因。