利用乳清蛋白肽降低血清胆固醇水平的产品和制备方法

摘要

本发明旨在研究以乳清浓缩蛋白为原料，对具有降低血清胆固醇水平的活性肽进行深入、系统的研究，研究生物酶技术、膜分级分离浓缩和多级色谱分离纯化技术，制出一些小分子量并具有降胆固醇功能乳清蛋白水解肽，为工业化生产提供理论基础和技术支撑。本发明采用多级色谱进行分离纯化，所得组分纯度以及胆固醇胶束溶解度抑制率更高，在凝胶过滤时采用去离子水作为洗脱液，与以往的盐类洗脱液相比更加温和，能很好的达到分离效果，并且不会带来盐离子，避免带来健康隐患。本发明所得产品安全性极高，无毒副作用，具有降低血清胆固醇水平的功能，易作为功能因子添加到各类保健食品中，可用于食品和医药行业，具有良好的市场前景。

主权项

一种降胆固醇肽产品，其特征在于，其制备步骤为：用碱性蛋白酶水解乳清蛋白溶液，得到乳清蛋白水解肽溶液，利用超滤粗分离、树脂脱盐及多级色谱分离纯化技术，逐步分级分离出胆固醇胶束溶解度抑制活性高的降胆固醇肽产品，并采用模拟人体胃肠道试验研究其稳定性，结果表明此肽在体内的稳定性强；其中，所述乳清蛋白溶液通过乳清浓缩蛋白WPC80配制得到，质量浓度是5%，加酶量为每1g乳清蛋白加碱性蛋白酶6000‑7000U，水解温度是55  ℃，pH为9.0，水解度为23.18%；超滤膜截留分子量为10kDa，温度为30℃，压力为0.15MPa；树脂是大孔吸附树脂DA201‑C；脱盐的条件为：静态摇床处理24h，动态洗脱流速为1 BV/h，用70%的乙醇洗脱；第一级色谱为凝胶过滤色谱，采用的是ÄKTA™prime蛋白质纯化系统，填料为具有分子筛作用的SepHadex G‑50，洗脱液为去离子水，压力为1.0 MPa，流速为1 mL/min，紫外检测波长为280 nm，经凝胶过滤色谱纯化后，得到的第二个组分峰的胆固醇胶束溶解度抑制率最高为47.67%，经分子量标准曲线计算其分子量在1900~3100Da范围内；第二级色谱是反相高效液相色谱（RP‑HPLC），色谱柱：C18色谱柱，流动相：A，0.1%的三氟乙酸水溶液；B，0.09%的三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脱程序，检测波长：215nm；柱温：30℃；进样量：10μL；经反相高效液相色谱纯化后得到的14个组分峰中，第五个洗脱峰的胆固醇胶束溶解度抑制率最高，为58.77%，分子量为2454Da。