一种太平洋牡蛎胚胎超低温冷冻保存方法

摘要

本发明属海洋生物技术领域，具体地讲是一种太平洋牡蛎胚胎超低温冷冻保存方法。选择活力95%以上的优质太平洋牡蛎担轮幼虫，用200目的筛绢过滤收集，加入适量添加剂，按担轮幼虫与抗冻保护剂的体积比9：1比例稀释混匀，在4℃孵育30分钟，分装于0.25ml或0.5ml麦管，分步程序降温至-180℃后投入液氮中长期保存。解冻时采用水浴解冻法，28℃水浴解冻5-10s，然后置于室温20℃至完全融化，加入到含5%BSA的新鲜灭菌海水检测担轮幼虫活力，获得复活的担轮幼虫高于70%。本发明的太平洋牡蛎胚胎长期冷冻保存方法对于太平洋牡蛎人工繁育、种质保存、遗传多样性及可持续养殖等方面有着重要意义。

主权项

一种太平洋牡蛎胚胎冷冻保存方法，其特征在于：太平洋牡蛎担轮幼虫期胚胎，加入抗冻保护剂，预冷后装入麦管中进行分步降温，‑40℃前采用两步慢速降温，‑40℃后采用快速降温至‑180℃后直接投入液氮中保存，28℃水浴解冻复温培育，检测运动率；所述抗冻保护剂为10％DMSO，太平洋牡蛎胚胎中添加有0.2M的海藻糖；所述两步慢速降温是指0～‑15℃降温速率为‑1℃/分钟，‑15～‑40℃降温速率为‑3℃/分钟，并且在‑15℃停留3分钟；所述快速降温是指‑40～‑180℃降温速率为‑20℃/分钟，降至‑180℃后直接投入液氮中长期保存。