一种基于荧光素和萤光素酶生物发光反应的免疫分析方法

摘要

本发明提供一种基于荧光素和萤光素酶生物发光反应的免疫分析方法及其应用。该方法包括步骤：(1)将包被物质包被在固相载体上，孵育后用缓冲液冲洗；(2)加入待测物标准品溶液，孵育后用缓冲液冲洗；(3)加入ALP标记的二抗，孵育后用缓冲液冲洗，所述二抗为抗待测物的抗体；(4)加入ATP溶液反应后，再加入生物发光底物反应，最后检测发光值，获得结果I；(5)将步骤(2)中所述的待测物标准品溶液替换成待测样品溶液，重复进行步骤(1)～(4)的操作，最后检测发光值，获得结果II，将结果II参比结果I，换算得到样品溶液中待测物的浓度；本发明的免疫分析方法灵敏度高、信号读出方式简单、检测线性范围宽、分析速度快。

主权项

一种基于生物发光反应的免疫分析方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)将包被物质包被在固相载体上，孵育后用缓冲液进行冲洗；(2)加入具有不同浓度梯度的待测物标准品溶液，孵育后用缓冲液进行冲洗；(3)加入以ALP标记的二抗，孵育后用缓冲液进行冲洗，所述二抗为抗待测物的抗体；(4)加入ATP溶液反应后，再加入生物发光底物进行反应，最后检测发光值，获得结果I；(5)将步骤(2)中所述的不同浓度梯度的待测物标准品溶液替换成待测样品溶液，重复进行步骤(1)～(4)的操作，最后检测发光值，获得结果II，将结果II参比结果I，判断待测样品溶液中待测物的浓度；其中，当待测物为完全抗原时，所述包被物质为能够与所述完全抗原对应结合且与所述二抗具有不同抗原结合位点的抗体，当待测物为抗体时，所述包被物质为与所述抗体对应的完全抗原或半抗原分子与蛋白质载体偶联形成的人工抗原；所述的生物发光底物为含有荧光素和荧光素酶的溶液。