竹节树的组织培养脱毒快繁方法

摘要

本发明公开了竹节树的组织培养脱毒快繁方法，经过竹节树材料前处理、竹节树材料选择处理、消毒过程、脱毒和脱污染过程、生根培养、温室驯化等过程即可。且在脱毒和脱污染过程中分别使用初代培养基、茎尖脱毒培养基、继代培养基、生根培养基对竹节树材料进行培养，使用改良MS培养基：大量元素中NH₄NO₃的浓度为1500mg/L，琼脂粉6g/L；pH5.8~6.0，使脱毒快繁能得以实现，速度快，繁殖系数大，继代周期约40天，生根周期约25天，可获得无毒苗，采用无性繁殖技术，其后代整齐一致，能很好保持母本的优良性状，经济效益高。

主权项

竹节树的组织培养脱毒快繁方法，其特征在于，具体步骤包括：1）竹节树材料前处理：将竹节树材料移栽到花盆里，放入温室，栽培基质用经过消毒的泥炭土和珍珠岩；然后对竹节树材料新梢全部短剪处理，并用洁净的自来水、均衡肥加500倍的多菌灵乳液制成肥水浇灌竹节树材料，浇灌次数视天气变化和基质湿度而定；2）竹节树材料选择处理：待新芽长到1.4‑1.6cm时，取表面光滑、生长粗、无病虫害的新芽，用消毒过的剪刀将其两侧叶片至叶柄处剪掉，并将新芽段剪下放入干净容器内迅速带入组培室进行消毒处理，且整个过程只有剪刀与截取的竹节树材料接触；3）消毒过程：将竹节树材料上滴两滴洗洁精，加蒸馏水震荡10分钟，然后用蒸馏水将泡沫洗净放入超净工作台；先用75%的酒精处理15秒，再用双蒸水清洗两次；再用0.5%次氯酸钠浸泡30分钟，每10分钟顺时针摇动一次，每次摇动1分钟，摇动后静置促使其内生菌缓慢渗出，处理完后再用双蒸水清洗两次，每次不少于3分钟；再用0.1%的氯化汞溶液顺时针摇动10分钟，然后用双蒸水清洗两次，再用0.05%的氯化汞溶液浸泡30分钟，处理过程同次氯酸钠，处理完后用双蒸水洗4次，用无菌滤纸吸干竹节树材料上水珠，将竹节树材料剪口切去0.4‑0.6cm接种到初代培养基上；4）脱毒和脱污染过程：经过14‑16天的培养，菌类高发期过后待竹节树材料污染情况稳定时，挑选细菌比较少的竹节树材料，切掉与培养基接触的部分，重新接种到同样的初代培养基上，以后每隔3天换一次培养基；连续换3次后，部分竹节树材料内生菌基本脱除，将这些竹节树材料的茎尖切下2‑3mm，接种到茎尖脱毒培养基上，等到分化出的芽点长到1cm长的茎段时，将这些芽从基部切下，接种到继代培养基上使其继续分化扩繁；5）竹节树的生根培养：待分化的新芽长到1.5cm‑2cm时，将其接种到生根培养基中，先暗培养一周后，再进行照光培养，18‑22天开始生根，每株2‑4条根，待根系长到1cm长时，将瓶苗移入炼苗温室，进行驯化培养；6）温室驯化：该过程要经过闭瓶炼苗7天，开瓶炼苗3天，然后将生根小苗分级用1000倍的多菌灵溶液浸泡3~5分钟，捞出晾干水分，栽到72孔穴盘中，浇透水，再用1000倍多菌灵液喷洒一次，将空气湿度控制在90%以上；2周后开始长出新叶，58‑62天后小苗长到9‑11cm或8片叶以上，炼苗结束，即能移栽到大田进行正常的田间水肥管理；所述初代培养基：3/4改良MS培养基附加6‑苄氨基腺嘌呤2.0mg/L和萘乙酸0.05mg/L；所述茎尖脱毒培养基：3/4改良MS培养基附加6‑苄氨基腺嘌呤1.5mg/L和萘乙酸0.1mg/L；所述继代培养基：3/4改良MS培养基附加6‑苄氨基腺嘌呤1.2mg/L和萘乙酸0.05mg/L；所述生根培养基：1/2改良MS培养基附加吲哚丁酸7mg/L，另外蔗糖调整为20g/L；其中，所述改良MS培养基中大量元素的NH₄NO₃的浓度为1500mg/L，琼脂粉6g/L，其余成分与浓度不变；pH5.8~6.0。