用Alu重复序列基因扩增引物且无需DNA抽提的检测血浆游离DNA的定量PCR方法

摘要

本发明提供一种能反映运动员过度训练情况的人血浆游离DNA水平的定量PCR检测方法，该方法的扩增引物特别设计，选用人类基因中表达最丰富的Alu重复序列基因，敏感性更高，无需DNA抽提。在训练前、训练后即刻采血，选择指尖血或静脉血20μl，肝素或EDTA抗凝。离心、收集血浆。将作为标准品的DNA和5倍稀释的各样本血浆加入定量PCR的反应体系：MaximaSYBRGreen/ROXqPCRMasterMix(2x)，12.5μl；正向和反向引物(50μM)，各0.2μl；标准品或5倍稀释后的样品，各1.0μl；不含DNA酶的水，11.1μl。根据标准品的浓度计算出样品的游离DNA水平。比较训练前、训练后即刻的血浆游离DNA水平，若几倍到数十倍增加可能是过度训练者。我们的定量PCR方法能作为血浆游离DNA水平的检测方法，能反映运动员的过度训练情况。

主权项

一种用Alu重复序列基因扩增引物且无需DNA抽提的检测血浆游离DNA的定量PCR方法，其特征是选用人类基因中表达最丰富的Alu重复序列基因，设计的扩增引物是：正向：5’‑atcctggctaacacggtgaa ‑3’，反向5’‑gatctcggctcactgcaag‑3’ 扩增产物152 bp；在训练前、训练后即刻采血，选择指尖血或静脉血20μ，肝素或EDTA抗凝，离心、收集血浆，血浆稀释5倍；无需DNA抽提进行定量PCR扩增；比较训练前、训练后即刻的血浆游离DNA水平。