一种蛋白质定点修饰的方法

摘要

本发明属于蛋白质定点修饰领域，涉及一种新的蛋白质定点标记新方法，可广泛适用于蛋白质光谱学研究领域，也适用于生物核磁研究，涉及含砜基（苯砜基，甲砜基）、硝基的顺磁标签PyMTA，DPA类似物T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7、T8的合成，这些顺磁标签对巯基具有明显的活性及反应的专一性。在温和的条件下（室温，中性，水溶液），首次通过亲核取代反应将顺磁标签与蛋白质进行连接，连接产率接近100%。PyMTA类似物通过硫醚键直接与蛋白质连接，增强了标签的刚性，获得很好的PCS，而且硫醚键在还原性和高pH条件下非常稳定，并能长期稳定存在。

主权项

一种蛋白质定点修饰的方法，其特征是，包括以下步骤：（1）定量称取合成标签加入到MQ超纯水中配置成50 mM的合成标签溶液，（2）向蛋白质ubiquitin E18C中加入1.5倍量的TCEP，并调节pH为7.5，静置，（3）将蛋白质ubiquitin E18C逐滴加入到5‑10倍体积量的合成标签溶液中，并保证滴加过程及最终pH为7.5左右，（4）采集反应不同时间之后混合物的¹H‑¹⁵N HSQC谱图，对反应进程进行检测，直到反应完全为止，（5）反应完全后，通过PD10脱盐柱或者阴离子交换柱进行产物分离，将多余的标签与新生成的小分子物质除去，修饰完成；其中合成标签选自具有双功能基团的顺磁标签T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7 和T8，其结构式如下：。