用Alu基因的同源基因B1基因且无需DNA提取的检测血浆游离DNA的定量PCR方法

摘要

本发明提供一种能反映大、小鼠过度训练情况的血浆游离DNA水平的定量PCR检测法，该法的扩增引物特别，选用人类基因中表达最丰富Alu基因的同源基因B1重复序列基因，敏感性更高，无需DNA抽提。训练前、后即刻采血，选择静脉血20ml，肝素或EDTA抗凝。离心、收集血浆。将作为标准品的DNA和5倍稀释各样本血浆加入定量PCR反应体系：MaximaSYBRGreen/ROXqPCRMasterMix(2x)，12.5ml；正向、反向引物(50mM)，各0.2ml；标准品或5倍稀释后的样品，各1.0ml；不含DNA酶的水，11.1ml。根据标准品浓度计算样品游离DNA水平。比较训练前、后即刻血浆游离DNA水平，若几倍到数十倍增加强烈提示大、小鼠过度训练可能。我们的定量PCR方法能作为血浆游离DNA水平的检测方法，能反映大、小鼠的过度训练情况。

主权项

一种用Alu基因的同源基因B1基因重复序列基因扩增引物且无需DNA抽提的检测血浆游离DNA的定量PCR方法，其特征是人类基因中最丰富的Alu基因在大、小鼠中的同源基因B1基因，并设计了扩增引物，设计的扩增引物是：正向： 5’‑CCA GGA CAC CAG GGC TAC AGA G ‑3’；反向：5’‑CCC GAG TGC TGG GAT TAA AG‑3’；扩增长度109 bp，在训练前、训练后即刻采血，选择静脉血20μl，肝素或EDTA抗凝，离心、收集血浆，血浆稀释5倍；无需DNA抽提进行定量PCR扩增；比较训练前、训练后即刻的血浆游离DNA水平。