靶向修饰的纯合生物体

摘要

本发明公开了纯合修饰生物体以及制备和使用这些生物体的方法。

主权项

产生非人纯合生物体的方法，其中，所述纯合生物体在选定的靶基因座处缺乏外源序列，所述方法包括：(a)用核酸酶将外源序列引入细胞，所述核酸酶选自一种或多种锌指核酸酶(ZFN)，所述核酸酶介导所述外源序列靶向整合入所述生物体基因组的选定基因座内，所述基因座含有至少第一和第二等位基因；(b)鉴定包含以下元件的细胞：(i)所述靶基因座第一等位基因中的所述外源序列以及(ii)选定靶基因座的第二等位基因中的非同源末端连接(NHEJ)修饰；(c)使步骤(b)中鉴定出的细胞发育至繁殖上成熟的生物体；(d)将所述繁殖上成熟的生物体彼此杂交；以及(e)鉴定在所述选定靶基因座的第一和第二等位基因处呈现NHEJ修饰的子代，从而产生在选定靶基因座缺乏外源序列的纯合生物体。