一种从杧果中提取、分离和纯化欧南斯皮酮D的方法

摘要

本发明公开了一种从杧果中提取、分离和纯化欧南斯皮酮D的方法。将杧果晒干、去核粉碎后，乙醇回流提取，D101大孔树脂富集，后采用高速逆流色谱进行分离和纯化。该发明的优势：本发明（1）先用大孔树脂有效成分进行富集，降低了后续工序的处理量；（2）采用高速逆流色谱进行分离和纯化，不仅实现了连续化作业、动态逆流提取，且提高了有效成分的得率。

主权项

一种从杧果中提取、分离和纯化欧南斯皮酮D的方法，其特征在于制备具体步骤如下：（1）乙醇提取：杧果切片，晒干，用粉碎机粉碎3kg，得到杧果粉末，过16目筛，将杧果粉末于若干滤纸筒中，在85℃水浴中用250mL60‑95%的乙醇回流提取6‑12h，收集杧果乙醇提取液；减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用；（2）D101大孔树脂富集：将D101型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为200‑300mL,径高比为1∶（10‑15）)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用；称取上述杧果乙醇提取物浸膏50g，经200~500mL的60~95%乙醇充分溶解后，向其中加入80~150mL水，静置过夜；将静置后的药液抽滤（0.22μm的滤膜），减压回收上清液中的乙醇除净，所得的杧果水溶液，用D101型大孔树脂按30%~100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液；用HPLC进行分析，确定选用90‑100%甲醇洗脱液作为杧果粗提物，待分离；按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分离纯化的杧果粗提物；（3）高速逆流色谱进行分离和纯化：用分液漏斗中配制石油醚‑氯仿‑甲醇‑水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜；两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用；准确称取杧果粗提物6.0g溶解于下相中，超声溶解，得到19g/L的样品溶液，备用；将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以10~25mL/min的速度泵入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至600~900r/m in，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量杧果粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。